1- دانشگاه آزاد شهرکرد 2- دانشگاه آزاد شهرکرد ، bio.gene84@gmail.com
چکیده: (433 مشاهده)
زمینه و هدف: نانو ذرات کیتوزاندر حال تبدیل شدن به یک جایگزین محبوب برای رساندن اسیدهای نوکلئیک به بافتها برای انتقال ژن (ژن درمانی) هستند. مطالعه حاضر، با هدف طراحی سازه ژنی چند اپیتوپی ترکیبی بر پایه ژنهای بیماریزای سالمونلا تیفیموریوم و اشریشیا کلی سویهO157:H7 و انتقال آن با کمک نانو ذرات کیتوزان به موش BALB/c، انجام شد. مواد و روشها:در این مطالعه تجربی، وکتور نوترکیب pcDNA3.1(+)حاوی سازواره ژنی چند اپیتوپی، طراحی و سنتز گردید. باکتری E.coliسویه TOP10Fبا وکتور مذکور ترانسفورم گردید. با استفاده از کیت استخراج پلاسمید، از باکتریهای ترانسفورم شده، پلاسمید استخراج و تائید گردید. در مرحله بعد، این ناقل نوترکیب همراه با نانو ذرات کیتوزان ترکیب شد و ویژگیهای کمپلکس پس از تولید، مورد بررسی قرار گرفت.کمپلکسهای حاوی پلاسمید به همراه نانو ذرات یا بدون نانو ذرات، در فواصل زمانی 0، 7 و 14 روز به عضله ران حیوانات تزریق شد. بافت حیوان جمعآوری و بیان سازه ژنی و سایتوکاینهای IFN-γو IL-10به روش رونوشت برداری معکوس مورد بررسی قرار گرفت. بافت طحال حیوانات نیز مورد بررسی هیستوپاتولوژیک قرار گرفت. یافتهها:صحت سنتز و استخراج وکتور نوترکیب با موفقیت تائید شد. نانو ذرات کیتوزان و وکتور نوترکیب به نسبت (1:1) ترکیب شدند. در حیوانات تحت تیمار با ناقل نوترکیب در مقایسه با گروه کنترل، بیان سازه ژنی با موفقیت تائید شد. بررسی سایتوکاینها نشان داد کهپاسخ ایمنی سلولی در گروههای چالش نسبت به گروه کنترلافزایش یافت؛ اما ساختار بافت طحال در گروهی که وکتور نوترکیب حامل سازه ژنی به همراه نانو ذرات کیتوزان منتقل شده بود، سالم و طبیعی بود. نتیجهگیری:این یافته ها نشان داد که وکتور نوترکیب پس از ترکیب با نانو ذرات کیتوزان، در بافت حیوان به درستی انتقال یافته، بیان شده است و آسیبی به پالپهای طحال نرسیده است. میتوان در آینده از این سازه ژنی چند اپیتوپی به عنوان واکسن علیه سالمونلا تیفیموریوم و اشریشیا کلی استفاده کرد.