خانم دنیا کاظمی، دکتر عباس دوستی، دکتر مصطفی شخصی نیایی،
دوره ۲۹، شماره ۴ - ( ۷-۱۴۰۳ )
چکیده
زمینه و هدف: آنتی‌ژن BAB۱-۰۲۷۸بروسلا آبورتوس در ایجاد بیماری بروسلوز نقش دارد. این آنتی‌ژن،پروتئینی به نام GcrA را رمزگذاری می‌کند که نقش اساسی در رونویسی ژن‌های هدف در چرخه سلولی دارد. از این رو BAB۱-۰۲۷۸ دارای پتانسیل‌های منحصر به فردی در استراتژی‌های درمانی علیه بروسلا آبورتوس می‌باشد. هدف از مطالعه حاضر تولید باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس مهندسی شده بیان کننده پروتئین BAB۱-۰۲۷۸ بروسلا آبورتوس می‌باشد.
مواد و روش‌ها: طراحی سازواره ژنی حاوی یک توالی سیگنال پپتیدی درون ناقل بیانی مبتنی بر القا با نیسین (pN۳z۸۱۴۸-Usp۴۵-BAB۱-۰۲۷۸) صورت گرفت و سنتز آن توسط شرکت GENEray انجام شد. پلاسمید نوترکیب در باکتری اشریشیا کلی ترانسفورم شد. ﺍﺳﺘﺨﺮﺍﺝ ﭘﻼﺳﻤﻴﺪ نوترکیب از باکتری‌های ترانسفورم شده صورت گرفت. لاکتوکوکوس لاکتیس توسط الکتروپوریشن هم با پلاسمید نوترکیب حاوی ژن هدف pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵-BAB۱-۰۲۷۸ و هم با پلاسمید فاقد ژن هدف ترانسفورم شد. تایید بیان BAB۱-۰۲۷۸ توسط تکنیک‌های واکنش زنجیره پلیمراز معکوس RT-PCR)) و سدیم دودسیل سولفات پلی آکریل آمید الکتروفورز ژل (SDS-PAGE) و وسترن بلات انجام شد.
یافته‌ها: BAB۱-۰۲۷۸ بروسلا آبورتوس در لاکتوکوکوس لاکتیس بیان و به وسیله RT-PCR مورد تایید قرار گرفت. تجزیه و تحلیل SDS-PAGE پروتئین‌های جدا شده از لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیب در مقایسه با لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم نشده پروتئینی با وزن مولکولی ۱۳ کیلو دالتون را نشان داد.
نتیجه‌گیری: نتایج PCR، هضم آنزیم محدود کننده و تعیین توالی توسط شرکت GENEray نشان داد که BAB۱-۰۲۷۸ به درستی در pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵ کلون شده است. SDS-PAGE و وسترن بلات برای آنالیز بیان پروتئین BAB۱-۰۲۷۸ استفاده شد. لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده می‌تواند گام مهمی جهت تحقیقات واکسن خوراکی علیه بروسلا آبورتوس باشد.
