دکتر مهسا راسخیان، دکتر مریم پورجلیلی، دکتر امید تولایی،
دوره ۲۸، شماره ۴ - ( مجله علمی دانشگاه علوم پزشکی کردستان ۱۴۰۲ )
چکیده
زمینه و هدف: درمانهای مرسوم موفقیت کمی در درمان سرطان نشان دادهاند. استفاده از قطعات آنتیبادی کنژوگه شده با پروتئینهای خاص و هدفمند کردن آن یک روش نوین در تولید داروهای ضد سرطان است. علیرغم مزایای میزبانهای پروکاریوتی، بیان پروتئین به شکل اجسام انکلوزیون بادی (سیتوپلاسمی) چالش برانگیز بوده و منجر به سختیهای بعدی میشود. تولید پروتئین به صورت محلول تا حد زیادی به حل این مشکل کمک میکند. هدف اصلی این مطالعه شبیهسازی و بیان لیگاند القاکننده آپوپتوز مرتبط با فاکتور نکروز دهنده تومور (TRAIL) کونژوگه با قطعه متغیر تک زنجیر آنتی بادی (scFV) ضد CD۲۰ آنتی بادی ضد CD۲۰ به عنوان یک پروتئین محلول با استفاده از تعدیل کننده کوچک وابسته به یوبیکویتین بود. سیستم پروتئین فیوژن اصلاح کننده (SUMO) در E. Coli به عنوان روشی جدید برای تولید بهینه داروهای ضد سرطان است.
مواد و روش ها: پرایمرهای مناسب برای یک توالی DNA از قبل طراحی شده که پروتئین فیوژن را کد میکند برای تکثیر قطعه استفاده شد و در پلاسمید pSUMO در ناحیه پائین دست توالی برچسب ژنیSUMO ساب کلون گردید. پس از تائید با روشهای استاندارد، پلاسمید نوترکیب به سویه E. Coli strain BL۲۱ (DE۳) منتقل شد. بیان توسط ایزوپروپیل بتا-دی-۱-تیوگالاکتوپیرانوزید القا شد. پروتئین های بیان شده توسط SDS-PAGE ارزیابی و سپس با کروماتوگرافی میل ترکیبی جداسازی شدند. برای تائید بیان پروتئین از وسترن بلات استفاده شد.
یافتهها: نتایج نشان داد که DNA پروتئین نوترکیب فیوژن به درستی ساب کلون شده و آنالیزهای مربوطه نشان داد که فرآیند بیان موفقیتآمیز بوده است. پروتئین فیوژن نوترکیب با تجزیه و تحلیل مناسب تائید شد.
نتیجهگیری: تولید پروتئینهای نوترکیب به صورت محلول در میزبان پروکاریوتی E. coli میتواند هزینههای مصروف در فرآیندهای پایین دستی را کاهش دهد و با توجه به نتایج مناسب این تحقیق در تولید پروتئین فیوژن AntiCD۲۰ scFV-TRAIL به صورت محلول می توان از روش استفاده شده در این تحقیق به منظور تولید محلول و عملکردی این گونه پروتئین های نوترکیب بهره برد.