|
طراحی گام به‌گام وکتورهای محبوب و شایع در دست‌ورزی ژنتیکی با استفاده از سیستم CRISPR/Cas9
|
مینا کلاهدوزمحمدی1    ، سارا پهلوان2 ، یاسر تهمتنی3 ، فتاح ستوده نژاد نعمت الهی4 ، مهدی توتونچی5 |
1- دانشجوی دکتری، گروه زیست‌شناسی،دانشکده علوم پایه، واحد علوم و تحقیقات،دانشگاه آزاد اسلامی،تهران، ایران،
2- استادیار، پژوهشگاه رویان، پژوهشکده زیست‌شناسی و فناوری سلول‌های بنیادی، گروه پژوهشی قلب و عروق، تهران، ایران،
3- استادیار، پژوهشگاه رویان، پژوهشکده زیست‌شناسی و فناوری سلول‌های بنیادی جهاد دانشگاهی، مرکز تحقیقات علوم سلولی، گروه سلول‌های بنیادی و زیست‌شناسی تکوینی، تهران، ایران
4- استادیار، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات، دانشکده علوم پایه، گروه زیست‌شناسی، تهران، ایران
5- دانشیار، پژوهشگاه رویان، پژوهشکده زیست شناسی و فناوری سلول‌های بنیادی جهاد دانشگاهی، مرکز تحقیقات علوم سلولی، گروه سلول‌های بنیادی و زیست‌شناسی تکوینی، تهران، ایران ، m.totonchi@royaninstitute.org |
|
|
چکیده: (1693 مشاهده) |
زمینه و هدف: ویرایش ژنوم روشی کارآمد و دقیق در مطالعات بیولوژیکی و پزشکی است. در میان طیف وسیعی از تکنیک‌های ویرایش ژنوم، تکرارهای کوتاه پالیندرومی بافاصله منظم خوشه‌ای (CRISPR) یکی از ساده‌ترین روش‌ها و درعین‌حال بسیار امیدوارکننده است. سیستم CRISPR از دو جزء کلیدی تشکیل شده است. یک آنزیم اندونوکلئاز به نام Cas9 و یک هدایت‌کننده RNA (gRNA) که اطمینان حاصل میکند که آنزیم Cas9 نقطه مناسبی از ژنوم را برش میدهد. اگرچه ویرایش ژنوم بر پایه CRISPR یکی از روش‌های مفید برای اصلاح ژنوم است؛ اما هنوز چالش‌های متعددی در مراحل این تکنیک وجود دارد.
مواد و روش‌ها: RNA های راهنما بر اساس مکان هدف و وکتور موردنظر طراحی و سفارش داده شدند. مراحل کلونینگ انجام شد و با تعیین توالی، به‌عنوان یک روش استاندارد طلایی تأیید شدند. فهرستی از RNA های راهنما کارآمد برای ژن LAMP-2 بر اساس پایگاه‌های داده برجسته موجود و با تجزیه‌وتحلیل و مقایسه اختصاصیت و عملکرد به‌عنوان دو ویژگی اصلی فراهم شد.
یافته‌ها: در این مطالعه سعی شده است تا چالش‌های اصلی در فرایند تهیه وکتورهای محبوب (pX330/pX459) سیستم CRISPR/Cas9 بررسی شوند. همچنین فهرستی از RNA های راهنما کارآمد برای یک ژن اتوفاژی نیز به‌عنوان مثال برای روشن شدن روش‌های طراحی RNA راهنما فراهم آمده است.
نتیجه‌گیری: در این مقاله سعی شده است تا مشکلاتی که احتمال می‌رود در طول طراحی RNA راهنما و آماده‌سازی پلاسمید به وجود آید، به تصویر کشیده شوند و به دنبال آن توصیه‌های مناسب برای حل آن‌ها ارائه شود.
|
|
| واژه‌های کلیدی: CRISPR/Cas9، ویرایش ژنوم، sgRNA، pX330/pX459، پلاسمید |
|
|
متن کامل [PDF 533 kb]
(794 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي اصیل |
موضوع مقاله:
بیوتکنولوژی
دریافت: 1400/8/16 | پذیرش: 1400/9/15 | انتشار: 1401/9/23
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
