|
بیان ژن کد کننده‌ی آنتی ژن BAB1-0278 باکتری بروسلا آبورتوس در باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس
|
دنیا کاظمی1    ، عباس دوستی 2، مصطفی شخصی نیایی3 |
1- دانشجوی دکتری. گروه زیست شناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
2- استاد، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران ، abbasdoosti@yahoo.com
3- استادیار، گروه زیست شناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران |
|
|
چکیده: (713 مشاهده) |
زمینه و هدف: آنتی‌ژن BAB1-0278بروسلا آبورتوس در ایجاد بیماری بروسلوز نقش دارد. این آنتی‌ژن،پروتئینی به نام GcrA را رمزگذاری می‌کند که نقش اساسی در رونویسی ژن‌های هدف در چرخه سلولی دارد. از این رو BAB1-0278 دارای پتانسیل‌های منحصر به فردی در استراتژی‌های درمانی علیه بروسلا آبورتوس می‌باشد. هدف از مطالعه حاضر تولید باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس مهندسی شده بیان کننده پروتئین BAB1-0278 بروسلا آبورتوس می‌باشد.
مواد و روش‌ها: طراحی سازواره ژنی حاوی یک توالی سیگنال پپتیدی درون ناقل بیانی مبتنی بر القا با نیسین (pN3z8148-Usp45-BAB1-0278) صورت گرفت و سنتز آن توسط شرکت GENEray انجام شد. پلاسمید نوترکیب در باکتری اشریشیا کلی ترانسفورم شد. ﺍﺳﺘﺨﺮﺍﺝ ﭘﻼﺳﻤﻴﺪ نوترکیب از باکتری‌های ترانسفورم شده صورت گرفت. لاکتوکوکوس لاکتیس توسط الکتروپوریشن هم با پلاسمید نوترکیب حاوی ژن هدف pNZ8148-Usp45-BAB1-0278 و هم با پلاسمید فاقد ژن هدف ترانسفورم شد. تایید بیان BAB1-0278 توسط تکنیک‌های واکنش زنجیره پلیمراز معکوس RT-PCR)) و سدیم دودسیل سولفات پلی آکریل آمید الکتروفورز ژل (SDS-PAGE) و وسترن بلات انجام شد.
یافته‌ها: BAB1-0278 بروسلا آبورتوس در لاکتوکوکوس لاکتیس بیان و به وسیله RT-PCR مورد تایید قرار گرفت. تجزیه و تحلیل SDS-PAGE پروتئین‌های جدا شده از لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیب در مقایسه با لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم نشده پروتئینی با وزن مولکولی ۱۳ کیلو دالتون را نشان داد.
نتیجه‌گیری: نتایج PCR، هضم آنزیم محدود کننده و تعیین توالی توسط شرکت GENEray نشان داد که BAB1-0278 به درستی در pNZ8148-Usp45 کلون شده است. SDS-PAGE و وسترن بلات برای آنالیز بیان پروتئین BAB1-0278 استفاده شد. لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده می‌تواند گام مهمی جهت تحقیقات واکسن خوراکی علیه بروسلا آبورتوس باشد.
|
|
| واژه‌های کلیدی: بروسلا آبورتوس، BAB1-0278، لاکتوکوکوس لاکتیس، واکسن، پروبیوتیک، الکتروپوریشن |
|
|
متن کامل [PDF 1069 kb]
(109 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي اصیل |
موضوع مقاله:
پزشکی مولکولی و ژنتیک
دریافت: 1401/10/15 | پذیرش: 1402/11/15 | انتشار: 1403/8/8
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
