fa بهینه سازی یک روش کالریمتری به منظور ارزیابی کمی آلکالین فسفاتاز برای تائید تمایز استخوانی سلول‌های بنیادی مزانشیمی بیوتکنولوژی Biotechnology پژوهشي اصیل Original Research <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">زمینه و هدف:</span></span></b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""> ارزیابی میزان بیان آلکالین فسفاتاز جهت تائید تمایز سلول‌های بنیادی به استئوبلاست به عنوان یکی از مارکرهای تشخیصی شناخته شده است. روش‌های متعددی از جمله ایمونوسیتوشیمی جهت سنجش آلکالین فسفاتاز در تحقیقات مورد استفاده قرار می‌گیرد. با توجه به محدودیت‌های استفاده از این روش، هدف از این مطالعه، بهینه‌سازی روش </span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">کالریمتری<b> </b></span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">به عنوان </span></span><span lang="FA" style="font-size:14.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">یک</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""> روش جایگزین، کم هزینه و کارآمد برای اندازه‌گیری کمی آلکالین فسفاتاز است.</span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">مواد و روش‌ها:</span></span></b> <span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">سلول‌های بنیادی مزانشیمی از بافت چربی انسان گرفته شد. سلول‌ها با استفاده از محیط القایی به استئوبلاست تمایز داده شدند. سطوح آلکالین فسفاتاز در روز صفر و روز بیست و یک تمایز با دو روش ایمونوسیتوشیمی و روش </span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">کالریمتری<b> </b></span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">بررسی شد.</span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">یافته‌ها:</span></span></b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""> یافته‌های ایمونوسیتوشیمی، افزایش معناداری (تقریباً 5 برابر) در سطح بیان آلکالین فسفاتاز در روز بیست و یک تمایز در مقایسه با روز صفر نشان داد (</span></span><span dir="LTR" new="" roman="" style="font-family:" times="">p < 0.0001</span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">). همچنین نتایج آنالیز آماری تست </span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">کالریمتری،<b> </b></span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">افزایش معناداری (تقریباً 9 برابر) در سطح بیان آلکالین فسفاتاز در روز بیست و یک تمایز در مقایسه با روز صفر نشان داد (</span></span><span dir="LTR" new="" roman="" style="font-family:" times="">p < 0.0001</span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">).</span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar="">نتیجه‌گیری:</span></span></b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""> داده‌های مقایسه‌ای کالریمتری و ایمونوسیتوشیمی نتایج مشابهی را نشان داد. این یافته ها، استفاده از روش رنگ سنجی را به عنوان روش جایگزین، کمی، سریع و کم هزینه جهت تعیین سطح آلکالین فسفاتاز در استئوبلاست های تمایز یافته از سلول‌های بنیادی مزانشیمی پیشنهاد می‌کند.</span></span></span></span></span></span></span><br> &nbsp; <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Background and Aim:</span></span></b><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""> Evaluation of the alkaline phosphatase expression is known as one of the diagnostic markers to confirm the stem cells differentiation into osteoblasts. Several methods, including immunocytochemistry, are used to measure alkaline phosphatase in different studies. Due to limitations of using this method, we decided to optimize the </span></span><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">calorimetric<b> </b></span></span></span><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">method as an alternative, low cost and efficient method for quantitative assessment of alkaline phosphatase.</span></span><span dir="RTL" lang="AR-SA" style="font-size:12.0pt"><span style="font-family:"B Zar""></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Materials and Methods:</span></span></b><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""> Mesenchymal stem cells derived from human adipose tissue were used. Cells were differentiated into osteoblasts using an induction medium. Alkaline phosphatase levels were assessed on the days 0 and 21 of differentiation using both immunocytochemistry and </span></span><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">calorimetric method</span></span></span><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">s.</span></span><span dir="RTL" lang="AR-SA" style="font-size:12.0pt"><span style="font-family:"B Zar""></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Results:</span></span></b><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""> Immunocytochemistry findings demonstrated a significant increase (approximately 5-fold) in alkaline phosphatase expression level on the 21^st day of differentiation compared to that on the day 0 (p <0.0001). Also, statistical analysis of the results of the </span></span><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">calorimetric<b> </b></span></span></span><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">test showed a significant increase (approximately 9-fold) in alkaline phosphatase expression level on the 21^st day of differentiation compared to&nbsp; that on the day 0 (p<0.0001). </span></span><span dir="RTL" lang="AR-SA" style="font-size:12.0pt"><span style="font-family:"B Zar""></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><b><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Conclusion:</span></span></b> <span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">Comparison of the data between calorimetric<b> </b>and<b> </b></span></span></span><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">immunocytochemistry showed similar results. These findings suggested that colorimetric assay can be used as an alternative,</span></span> <span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">quantitative, fast, and low cost method for determining the levels of alkaline phosphatase in osteoblasts differentiated from mesenchymal stem cells.</span></span><span dir="RTL" lang="AR-SA" style="font-size:12.0pt"><span style="font-family:"B Zar""></span></span></span></span></span><br> &nbsp; آلکالین فسفاتاز, تمایز, سلول‌های بنیادی, استئوبلاست, روش کالریمتری Alkaline phosphatase, Differentiation, Stem cells, Osteoblast, Calorimetric method 25 36 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-6623-1&slc_lang=fa&sid=1 Samaneh Harimi سمانه حریمی samaneh.harimi@gmail.com 5400319475328460054057 5400319475328460054057 No Master of Medical Biotechnology, Student Research Committee, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran کارشناسی ارشد زیست فناوری پزشکی، کمیته تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Fatemeh Zare فاطمه زارع FatemeZare91@gmail.com 5400319475328460054058 5400319475328460054058 No Assistant Professor, Reproductive Immunology Research Center, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran استادیار، مرکز تحقیقات ایمونولوژی تولیدمثل، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران Farzaneh Fesahat فرزانه فصاحت farzaneh.fesahat@gmail.com 5400319475328460054059 5400319475328460054059 No Assistant Professor, Reproductive Immunology Research Center, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran استادیار، مرکز تحقیقات ایمونولوژی تولیدمثل، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران Mahdieh Mondanizadeh مهدیه موندنی زاده m_mondanizadeh@yahoo.com 4132322084 5400319475328460054060 Yes Associate Professor, Department of Biotechnology and Molecular Medicine, School of Medicine, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran دانشیار، گروه زیست‌فناوری و پزشکی مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم‌ پزشکی اراک، اراک، ایران