fa بهینه نمودن تکنیک تکثیر هم دما به واسطه لوپ (LAMP) جهت تشخیص ویروس هرپس سیمپلکس تیپ 1 و 2 عمومى General پژوهشي اصیل Original Research چکیده زمینه و هدف: ویروس هرپس سیمپلکس تیپ 1 و 2 عامل ایجاد عفونت سیستم عصبی مرکزی (آنسفالیت) در انسان می‌باشد. روشهای مولکولی، بهترین روش تشخیص این عامل بیماریزا می‌باشند. در این مطالعه تکنیک مولکولی جدید LAMP جهت تشخیص هر دو تیپ این ویروس مورد ارزیابی قرار گرفت. روش بررسی: در یک مطالعه تجربی، 184 نمونه مایع مغزی- نخاعی (CSF) از بیمارستان مفید تهران تهیه شد. DNA نمونه‌ها بوسیله کیت DNP سیناژن استخراج شد. یک دسته 6 تایی پرایمر، ویژه ژن DNA پلیمراز ویروس HSV طراحی و تست‌های حساسیت و ویژگی این تکنیک انجام گردید. محصول واکنش LAMP با افزودن سایبرگرین مورد تایید قرار گرفت. نتایج تکنیک LAMP با نتایج تکنیک PCR بوسیله آزمون مربع کای مقایسه شد. یافته‌ها: حساسیت تکنیک بهینه شده LAMP تا 5 پارتیکل ویروس و حساسیت تکنیک PCR تا 50 پارتیکل ویروس تعیین گردید. هر دو تکنیک LAMP و PCR در تشخیص تیپ 1و 2 ویروس HSV، از ویژگی 100% برخوردار بودند. از 184 نمونه CSF، تکنیک LAMP 60 نمونه را مثبت تشخیص داد در حالیکه 45 نمونه با تکنیک PCR، مثبت گزارش شدند. حساسیت تکنیک LAMP، 10 برابر بالاتر از تکنیک PCRبه دست آمد. مقایسه بین نتایج دو روش با استفاده از آزمون مربع کای نشان داد این دو روش در سطح معنی دار p< 0.05 با یکدیگر تفاوت دارند. نتیجه‌گیری: تشخیص دو تیپ 1و 2 ویروسHSV موجود در نمونه‌های C‏SF ، بوسیله تکنیک LAMP از حساسیت و ویژگی بالایی برخوردار است. کلید واژه‌ها: ویروس هرپس سیمپلکس، LAMP، مایع مغزی - نخاعی وصول مقاله: 1/9/89 اصلاحیه نهایی: 6/11/89 پذیرش مقاله: 24/11/89 ABSTRACT Background and Aim: Type 1 and type 2 herpes simplex (HSV) virus cause infection of central nervous system (encephalitis) in human. The molecular techniques are the best methods for detection of HSV. In this study we evaluated the novel molecular technique of LAMP for detection of HSV-1 and HSV-2. Material and Methods: In this experimental study 184 cerebrospinal fluid (CSF) samples were collected from Mofid Hospital. DNA of every sample was extracted by use of Sinagen DNP Kit. Based on the HSV DNA polymerase gene, a set of 6 primers were designed and sensitivity and specificity of this method were determined. By adding SYBER Green, LAMP product was identified. The results of LAMP method were compared to those of PCR by chi-square test. Results: Sensitivity of LAMP method determined to be 5 copies/ tube and sensitivity of PCR method determined to be 50 copies/ tube. Both LAMP and PCR methods showed 100% specificity for detection of HSV type 1 and type2. Among 184 samples, 60 samples were positive by LAMP but 45 samples were positive by PCR method. Sensitivity of LAMP was 10 times higher than that of PCR. Comparison of the results of the two methods by means of chi-square test showed a significant difference (p‹0.05). Conclusion: LAMP method had high sensitivity and specificity for detection of type 1 and type 2 HSV in CSF samples. Key word: HSV, LAMP, CSF Conflict of Interest: Nill Received: Nov 22, 2010 Accepted: Jan 14, 2011 ویروس هرپس سیمپلکس، LAMP، مایع مغزی - نخاعی HSV, LAMP, CSF 56 63 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-281&slc_lang=fa&sid=1 Asmaa Bahrami اسماء بهرامی 540031947532846001946 540031947532846001946 No Islamic Azad University, Science & Research Branch, Tehran دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات، تهران Mohammad Hasan Shahhosseiny محمد حسن شاه حسینی shahhosseiny@yahoo.com 540031947532846001947 540031947532846001947 Yes Islamic Azad University, Shahr-e- Qods Branch دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهر قدس Kayhan Azadmanesh کیهان آزاد منش 540031947532846001948 540031947532846001948 No Pasteur Institute of Iran انستیتو پاستور تهران Zahra Noormohamadi زهرا نورمحمدی 540031947532846001949 540031947532846001949 No Islamic Azad University, Science & Research Branch دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات، تهران Elham Moslemi الهام مسلمی 540031947532846001950 540031947532846001950 No Islamic Azad University, East Tehran Branch دانشگاه آزاد اسلامی واحد تهران شرق Farzaneh Jadali فرزانه جدلی 540031947532846001951 540031947532846001951 No Pathology Dept., Mofid Hospital of Tehran بیمارستان کودکان مفید، تهران