fa ارزیابی ایمنی زائی پروتئین کایمر نوترکیب در بردارنده Intimin - EspA -Stx2b علیه باکتری E.coli O157 H7 عمومى General پژوهشي اصیل Original Research <strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">زمینه و هدف: </span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">انتروهموراژیک <em>اشرشیا کلی</em> </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">(EHEC) </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;باعث طیف گسترده ای از عفونت ها مانند اسهال، کولیت هموراژی و سندرم همولیتیک اورمیک می شود</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">.</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> با توجه به خطرات ناشی از درمان آنتی بیوتیکی در عفونت</span></span> <em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">E.coli </span></span></span></em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">O157: H7</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">، واکسن ها روشی امید بخش برای پیشگیری از عفونت را ارائه می کنند.&nbsp; پروتئین های کایمر نوترکیب دربردارنده چندین ایمونوژن&nbsp; می توانند ایجاد ایمنی علیه عفونت های باکتریایی را القاء کنند. هدف از این مطالعه بررسی ایمنی زایی آنتی ژن کایمر سه ظرفیتی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">Intimin </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">-</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> EspA -Stx2b </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;علیه باکتری</span></span> <em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">E.coli </span></span></span></em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">O157 H7 </span></span></span>&nbsp;<span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">بود</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">.</span></span></span><br> <strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">روش بررسی: </span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">در این مطالعه توصیفی-آزمایشگاهی،</span></span> <span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">پروتئین کایمر نوترکیب تحت تاثیر</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">IPTG </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;در</span></span> <em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">E.coli</span></span></span></em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> BL21 DE3 </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">بیان شد</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">.</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> بیان پروتئین توسط </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">SDS</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">-</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PAGE </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;و وسترن بلات ارزیابی شد</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">.</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> پروتئین نوترکیب با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی </span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">Ni-NTA </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">تخلیص گردید. ایمنی زایی در موش ها با پروتئین خالص انجام و تیتر آنتی بادی توسط</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">ELISA </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">تعیین شد</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">.</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> بعد از ایمنی زایی، موشها با باکتری آلوده ، ریزش باکتری و مرگ و میر حیوان ها بررسی گردید.</span></span> <a name="OLE_LINK9"></a><a name="OLE_LINK8"><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">بررسی آماری با آزمون های دانکن و </span></span></a><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">T-test</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> با نرم افزار </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">SPSS</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> انجام شد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">یافته ها: </span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">پروتئین در میزبان</span></span> <em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">E.coli </span></span></span></em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">BL21 (DE3) </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">بیان شد و آنالیز </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">SDS-PAGE </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;بیان پروتئین نوترکیب با وزن مولکولی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">kD</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> 63 را نشان داد. پروتئین کایمر توسط وسترن بلات تایید شد. نتایج</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">ELISA </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">نشان داد که ایمنی زایی با پروتئین پاسخ هومورال به </span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">EspA</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">Intimin </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;و</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;"> Stx2b</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">را القاء کرد<a name="OLE_LINK7"></a><a name="OLE_LINK4">. ریزش باکتری در موش های ایمن تا </a></span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">cfu/ml</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> ²</span> 10 و مرگ و میر نیز&nbsp; تا 60 درصد کاهش یافت.</span><br> <strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">نتیجه گیری: </span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">نتایج نشان داد که پروتئین کایمر پاسخ ایمنی هومورال را تحریک کرده و</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> باعث حفاظت موش ها در برابر چالش با </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">E. coli </span></span></span></em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">O157: H7</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> می شود</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">کلمات کلیدی:&nbsp; </span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">انتروهموراژیک<em> اشرشیاکلی</em>؛ اینتیمین؛ شیگا توکسین؛ پروتئین ترشحی اکلای؛ پروتئین کایمر؛ ایمنی زایی</span></span><br> <span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">وصول مقاله:14/6/96 اصلاحیه نهایی:12/7/96 پذیرش:18/7/96</span></span> <strong>Background and Aim</strong><strong><span dir="RTL">:</span></strong> &nbsp;Enterohemorrhagic <em>Escherichia coli</em> (EHEC) cause a wide spectrum of infections, such as diarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic&ndash;uremic syndrome. Considering the risks associated with antibiotic therapy against EHEC infection, vaccines can be a promising method for prevention of infections. Recombinant chimeric proteins containing multiple immunogens could induce immunity against bacterial infections. The aim of this study was to evaluate immunogenecity of trivalent chimeric antigen EspA -Stx2b -Intimin against <em>E.coli</em> O157 H7 infection.<br> <strong>Material and Methods</strong>: In this descriptive-laboratory study,recombinant chimeric protein was expressed in <em>E.coli</em> BL21 DE3 by use of IPTG. The protein expression was evaluated by SDS-PAGE and western blotting analysis. The recombinant protein was purified using Ni&ndash;NTA affinity chromatography. The immunization was conducted in mice with purified protein and antibody titers were determined by ELISA. Following immunization, mice were infected with <em>E.coli </em>O157:H7 and <a name="OLE_LINK6"></a><a name="OLE_LINK5">evaluated for bacterial shedding and mortality. Using SPSS software, statistical analysis was performed by Duncan&#39;s test and T-test.</a><br> <strong>Results</strong>: The protein was expressed in <em>E.coli</em> BL21 (DE3) and SDS-PAGE analysis showed expression of recombinant protein with molecular weight of 63kD. Western blot analysis confirmed presence of chimeric protein. ELISA results showed that immunogenic properties of chimeric protein induced humoral response to EspA, intimin and Stx2b. Bacterial shedding in immunized mice decreased to 10² cfu/ml and mortality rate was reduced to 60%.<br> <strong>Conclusion</strong>: The results showed that the chimeric protein induced humoral response and protected the mice against <em>E.coli </em>O157:H7.<br> <strong>Keywords: </strong>Enterohemorrhagic <em>Escherichia coli</em>; Intimin; Shiga toxin; <em>E.coli</em> secreted protein A, Chimeric protein, Immunogenicity.<br> &nbsp;<br> <strong>Received:</strong> Sep 5, 2017&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; <strong>Accepted:</strong> Oct 10, 2017 انتروهموراژیک اشرشیاکلی؛ اینتیمین؛ شیگا توکسین؛ پروتئین ترشحی اکلای؛ پروتئین کایمر؛ ایمنی زایی Enterohemorrhagic Escherichia coli, Intimin, Shiga toxin, E.coli secreted protein A, Chimeric protein, Immunogenicity. 49 62 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-189&slc_lang=fa&sid=1 Mojtaba Taheri مجتبی طاهری 5400319475328460017049 5400319475328460017049 No Biology Research Center, Faculty of Science, Imam Hussein University, Tehran, Iran دانشکده علوم، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران. Shahram Nazarian شهرام نظریان nazarian56@gmail.com 5400319475328460017050 5400319475328460017050 Yes Biology Research Center, Faculty of Science, Imam Hussein University, Tehran, Iran مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران Firooz Ebrahimi فیروز ابراهیمی 5400319475328460017051 5400319475328460017051 No Biology Research Center, Faculty of Science, Imam Hussein University, Tehran, Iran مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران Mostafa Bakhshi مصطفی بخشی 5400319475328460017052 5400319475328460017052 No Biology Research Center, Faculty of Science, Imam Hussein University, Tehran, Iran دانشکده علوم، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران Javad Fathi جواد فتحی 5400319475328460017053 5400319475328460017053 No Biology Research Center, Faculty of Science, Imam Hussein University, Tehran, Iran دانشکده علوم، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران