fa تاثیر ویتامین ث بر القاء کلونی‌زایی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند در محیط آزمایشگاه عمومى General پژوهشي اصیل Original Research <strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">زمینه و هدف: </span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">تکنولوژی استفاده از سلول&shy;های بنیادی به دلیل عدم وجود یک سیستم کشت ایده&shy;آل برای رشد و تکثیر این سلول&shy;ها محدود شده است. </span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">هدف از این مطالعه</span></span> <span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">بررسی اثر غلظت&shy;های مختلف </span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">ویتامین ث</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> بر القاء کلونی&shy;زایی این سلول&shy;ها در محیط کشت است.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">روش بررسی:</span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> سلول&shy;های اسپرماتوگونی بیضه&shy; بره&shy; نابالغ طی دو مرحله هضم آنزیمی جدا و به روش حذف تمایزی خالص&shy;سازی شدند. این سلول&shy;ها به مدت 10 روز به چهار روش تیمار شدند: گروه شاهد شامل کشت ساده سلول&shy;های اسپرماتوگونی در محیط </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">DMEM</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> حاوی 1 درصد آنتی&shy;بیوتیک و 5 درصد </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">FBS</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> و تیمارهای 1، 2 و 3 </span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">شامل</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> محیط بالا و به ترتیب 20، 40 و 60 میکروگرم بر میلی&shy;لیتر </span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">ویتامین ث</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> بود. تعویض محیط کشت هر 3 روز انجام شد و تعداد و قطر کلونی&shy;های تشکیل شده در روزهای 4، 7 و 10 پس از کشت به وسیله&shy; میکروسکوپ معکوس بررسی گردید. شناسایی سلول‌ها با رنگ‌آمیزی ایمنوسیتوشیمی علیه </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PGP9.5</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> انجام شد. یافته‌های حاصل از پنج بار تکرار با استفاده از نرم افزار </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">R</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> و آزمون آماری آنالیز واریانس مورد بررسی قرار گرفت و 05/0</span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">></span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">p</span></span></span> <span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;بعنوان سطح معنی‌داری تعیین گردید.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">یافته ها:</span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> مساحت کلونی&shy;های اسپرماتوگونی در روز 7 در تیمار 2 (41/0) اختلاف معنی&shy;داری با تیمار 3 (08/0) داشت (05/0</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">P<</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">). همچنین مساحت کلونی&shy;ها در روز 10 کشت در تیمار 2 با دیگر گروه‌ها اختلاف معنی&shy;دار داشت (05/0</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">P<</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">).</span></span><br> <strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">نتیجه گیری:</span></span></strong> <span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">نتایج حاصل از این مطالعه نشان می&shy;دهد که</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> ویتامین ث</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> در دوز 40 میکروگرم بر میلی&shy;لیتر دارای تاثیر مثبت افزایشی بر مساحت کلونی&shy;های اسپرماتوگونی است ، اما روی تعداد سلول&shy;های اسپرماتوگونی بی تاثیر است.</span></span><br> <a name="_Toc448052529"></a><a name="_Toc297620707"></a><a name="_Toc297620541"></a><a name="_Toc297620235"><strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">کلمات کلیدی</span></span></strong></a><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">:</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> سلول بنیادی اسپرماتوگونی، ویتامین ث، کشت سلول</span></span><br> <span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">وصول مقاله :20/9/95 اصلاحیه نهایی:23/1/96 پذیرش:21/5/96</span></span> <strong>Background and Aim</strong><em>:</em> The technology of using spermatogonial stem cells (SSCs) has been limited due to lack of an ideal culture system for growth and proliferation. The aim of this study was to investigate the effects of different doses of vitamin C on SSCs colony formation in vitro.<br> <strong>Materials and Methods</strong><em>:</em> The cells were isolated from testes of prepubertal lambs by two enzymatic digestions, purified by differential platting, and then treated for 10 days by using 4 methods: Simple culture including SSCs in DMEM containing 1% antibiotic and 5% FBS as our control group and for the three other cultures we used the same culture medium as that in control group plus 20, 40 and 60 &micro;g/ml of vitamin C respectively. Culture media were refreshed every 72h and colony numbers and diameters were determined on the &nbsp;4^th , 7^th &nbsp;and 10^th &nbsp;days after the beginning of culture by using inverted microscope. Spermatogonial cells were identified by immunocytochemistry staining against PGP9.5. Using R software, the results obtained from 5 repeats were evaluated by ANOVA. P<0.05 was considered significant.<br> <strong><em>Results</em></strong>: On the 7^th day, we found a significant difference between the culture No. 2 (0.41 mm²) and culture No. 3 (0.08 mm²) in regard to spermatogonial colonies surface areas (P<0.05). Also, colonies surface areas on the 10^th day in the culture No. 2 was significantly greater than those in the other groups (P<0.05).<br> <strong>Conclusion</strong>: The results of this study showed that vitamin C with a dose of 40 (&mu;g/ml) was effective in increasing the surface area of spermatogonial colonies. But it had no effect on spermatogonial cell number.<br> <strong>Keywords: </strong>Spermatogonial stem cells, Vitamin C, Cell culture.<br> &nbsp;<br> <strong>Received:</strong> Dec 10, 2016&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; <strong>Accepted:</strong> Aug 12, 2017 سلول بنیادی اسپرماتوگونی, ویتامین ث, کشت سلول Spermatogonial stem cells, Vitamin C, Cell culture. 32 43 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-175&slc_lang=fa&sid=1 Mahya Bahrami محیا بهرامی 5400319475328460016167 5400319475328460016167 No Razi University, Kermanshah, Iran. دانشکده دامپزشکی، دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران Peiman Rahimi-Feyli پیمان رحیمی فیلی drp.rahimi@gmail.com 5400319475328460016168 5400319475328460016168 Yes Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Razi University, Kermanshah, Iran گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران Ali Asgar Moghaddam علی اصغر مقدم 5400319475328460016169 5400319475328460016169 No Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Razi University, Kermanshah, Iran گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران