fa اثر ضدسرطانی مهار فسفاتیدیل‌اینوزیتول-3 کیناز در رده سلول‌های لوسمیک NB4 عمومى General پژوهشي اصیل Original Research <strong><span style="font-family:b zar mso-ascii-font-family:times new roman;"><span style="font-size:12.0pt;">زمینه و هدف:</span></span></strong> <span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">طی دهه&shy;های اخیر، مطالعات نشان داده&shy;اند که فعالیت ناهنجار مسیر فسفاتیدیل&shy;اینوزیتول-3 کیناز (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PI3 Kinase</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">) یک مرحله ضروری برای شروع و حفظ تومورزایی در بسیاری از سرطان&shy;ها از جمله لوسمی پرومیلوسیتی حاد </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">(Acute promyelocytic leukemia)</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> می&shy;باشد. در این مطالعه، بر آن شدیم تا اثر ضدسرطانی مهارکننده تمام ایزوفرمی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PI3K</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> را بر رده&shy; سلولی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">NB4</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> (برگرفته از</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">APL</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">) مورد ارزیابی قرار دهیم. </span></span><br> <strong><span style="font-family:b zar mso-ascii-font-family:times new roman;"><span style="font-size:12.0pt;">روش بررسی</span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">:</span></span> <span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">در این مطالعه، به منظور بررسی میزان فعالیت مسیر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PI3K/Akt</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> در سلول&shy;های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">NB4</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> و همچنین ارزیابی تاثیر مهارکننده </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PI3K</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> در بلوک کردن این مسیر، سلول&shy;ها با با غلظت&shy;های مختلف از </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">BKM120</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> تیمار شدند و سپس میزان فسفریلاسیون </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">Akt</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> توسط روش وسترن بلاتینگ مورد ارزیابی قرار گرفت. در ادامه، جهت سنجش تاثیر دارو بر فعالیت متابولیک، شاخص آپوپتوز و تغییر بیان ژن&shy;&shy;های دخیل در آپوپتوز به ترتیب آزمون&shy;های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">MTT</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">،</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">Annexin-V/PI apoptosis assay </span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">Real Time Quantitative RT-PCR</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> انجام شد. در انتها معنادار بودن یافته&shy;ها از نظر آماری از طریق روش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">t-test</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> و با کمک نرم&shy;افزار </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">SPSS 17</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> مورد ارزیابی قرار گرفت.</span></span> <ul> <li dir="RTL" style="margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;"><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">نتایج به دست آمده نشان داد که مهار مسیر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PI3K/Akt</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> توسط </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">BKM120</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> منجر به کاهش فعالیت متابولیک سلول&shy;های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">NB4</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> به صورت وابسته به دوز و زمان می&shy;گردد (001/0</span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">></span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">P</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">). همچنین نتایج حاصل از فلوسایتومتری و </span></span><u><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">RT-PCR</span></span></span></u><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> نشان داد مرگ سلولی القاء شده در سلول&shy;های تیمار شده با دارو افزایش چشمگیری داشته است (001/0</span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">></span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">P</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">) و بیان </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">mRNA</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">Bax</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> نسبت به </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">Bcl-2</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> افزایش داشته است (001/0</span></span><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">></span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">P</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">).</span></span></li> <li dir="RTL" style="margin-bottom:.0001pt;text-align:justify;"><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">نتایج به دست آمده در این مطالعه حاکی از اثر آپوپتوتیک مطلوب </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">BKM-120</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> از طریق مهار مسیر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">PI3K/Akt</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> روی سلول&shy;های رده </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">NB4</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> می&shy;باشد. </span></span></li> </ul> <strong><span style="font-family:b zar mso-ascii-font-family:times new roman;"><span style="font-size:12.0pt;">کلید واژه&shy;ها:</span></span></strong> <span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">آپوپتوز، فسفاتیدیل-3 کیناز، لوسمی پرومیلوسیتیک حاد، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">NB4</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">BKM120</span></span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">.</span></span><br> <span style="font-family:b zar mso-ascii-font-family:times new roman;">وصول مقاله : 5/11/95 اصلاحیه نهایی:11/4/96 پذیرش:21/5/96</span> <strong>Background and Aim:</strong> In the last decades, experimental studies have shown that aberrant activation of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) pathway is an essential step for both initiation and maintenance of tumorgenesis in a wide range of human cancers, such as, acute promyelocytic leukemia (APL). In this study, we investigated the cytotoxic effect of BKM120, a pan-PI3K inhibitor, on APL-derived NB4 cells.<br> <strong>Material and Methods:</strong> To evaluate the inhibitory effect of BKM120 on PI3K/AKt pathway, we analyzed the expression and phosphorylation level of Akt using western blot. Using western blot, phosphorylation rate of Akt was evaluated. In order to evaluate the effect of the inhibitor on the metabolic activity, apoptosis index and alteration of the expression of apoptotic-related genes, we used MTT assay, annexin-V/PI staining and RT-PCR analysis respectively. Using SPSS 17 software data were analyzed by t-test.<br> <strong>Results: </strong>We found that inhibition of PI3K/Akt pathway by BKM120 resulted in reduction of metabolic activity of APL-derived NB4 cells in a dose- and time-dependent manner (p&le; 0.001). Moreover, the results obtained from flowcytometry and RT-PCR analysis showed a significant increase in BKM120 induced apoptotic cell death in the inhibitor-treated cells (p&le; 0.001). We found BKM120 increased iBax/Bcl-2 transcriptional ratio (p&le; 0.001).<br> <strong>Conclusion: </strong>BKM-120 exerts a favorable apoptotic effect on NB4 cells through inhibition of the PI3K/Akt signaling pathway.<br> <strong>Key words:</strong> Apoptosis, Phosphatidylinositol 3-kinase, Acute promyelocytic leukemia, NB4, BKM120.<br> &nbsp;<br> <strong>Received:</strong> Jan 24, 2017&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; <strong>Accepted:</strong> Aug 12, 2017 آپوپتوز, فسفاتیدیل-3 کیناز, لوسمی پرومیلوسیتیک حاد, NB4, BKM120. Apoptosis, Phosphatidylinositol 3-kinase, Acute promyelocytic leukemia, NB4, BKM120. 22 31 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-174&slc_lang=fa&sid=1 Mahda Delshad مهدا دلشاد 5400319475328460017171 5400319475328460017171 No Department of Hematology and Blood banking, School of Allied Medicine Sciences, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه خون‌شناسی و بانک‌خون، دانشکده پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران Ava Safaroghli-Azar آوا صفراغلی آذر 5400319475328460017172 5400319475328460017172 No Department of Hematology and Blood banking, School of Allied Medicine Sciences, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه خون‌شناسی و بانک‌خون، دانشکده پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران Davood Bashash داود بشاش d.bashash@sbmu.ac.ir 5400319475328460017173 5400319475328460017173 Yes Department of Hematology and Blood Banking, School of Allied Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه هماتولوژی و بانک خون، دانشکده پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران