fa بررسی اثر فاکتور رشد اپیدرمال بر تکوین جنین‌های 16-8 سلولی موش و بیان ژن گیرنده این فاکتور پس از انجماد شیشه‌ای عمومى General پژوهشي اصیل Original Research چکیده زمینه و هدف: انجماد جنین‌های انسانی یک فعالیت روتین در درمانگاههای درمان ناباروری می‌باشد. تکوین موفقیت‌آمیز و لانه‌گزینی جنین‌های منجمد شده به میزان زیادی به محیط کشت مناسب، فاکتورهای رشد، سایتوکاینها و بیان ژنومی دارد. مطالعات اخیر بیانگر نقش مهم فاکتور رشد اپیدرمال (EGF) و رسپتور آن در تکوین جنین و مراحل لانه‌گزینی می‌باشند. هدف از این مطالعه تعیین تأثیر فاکتور رشد اپیدرمال در تکوین قبل از لانه‌گزینی و بیان رسپتور آن در جنین موش منجمد شده با استفاده از نی کشیده شده می‌باشد. روش بررسی: جنین‌های 16-8 سلولی 66 تا 72 ساعت پس از تزریق HCG از موشهای تحریک تخمک‌گاری شده نژاد NMRI بدست آمدند و به 4 گروه (دو گروه شاهد و دو گروه آزمون) تقسیم شدند. جنین‌های گروه شاهد 1و2 به مدت 96 ساعت در محیط MEM-α -و (+EGF(10 ng/ml MEM-α کشت داده شدند. جنین‌های گروه آزمون 1 و 2 بلافاصله پس از جمع‌آوری منجمد شدند و پس از ذوب به ترتیب در دو محیط MEM-α و MEM-α +EGF (10 ng/ml) برای مدت 96 ساعت کشت داده شدند. تکوین جنین‌ها بطور روزانه ثبت شد. نتایج بدست آمده با استفاده از آزمون بررسی شدند. بررسی بیان ژن گیرنده با روش RT-PCR در جنین‌های خارج شده و یا در حال خروج از زونا صورت گرفت. به دنبال واکنش RT (ترجمه معکوس) واکنش PCR با استفاده از پرایمرهای Nested صورت پذیرفت تا دقت و حساسیت کار افزایش یابد. یافته‌ها: میزان تشکیل بلاستوسیست و خروج از زونا در جنین‌های منجمد شده به میزان قابل توجهی کمتر از جنین‌های غیرمنجمد بود. میزان دژنراسیون در جنین‌های منجمد شده بوضوح بالاتر بود. مقایسه دو گروه شاهد 1 با 2 و آزمون 1 با 2 بصورت دو به دو نشان داد که میزان تشکیل بلاستوسیست، خروج از زونا و دژنراسیون در بین این گروهها از تفاوت معنی‌داری برخوردار نیست. بررسی‌های مولکولی با روش RT-PCR نشان دادند که پس از 96 ساعت کشت جنین‌ها mRNA مربوط به گیرنده فاکتور رشد اپیدرمال در هر 4 گروه شاهد 1و 2، آزمون 1 و 2 بیان می‌شود. نتیجه‌گیری: افزودن EGF با غلظت 10 ng/ml به یک محیط کشت مانند αMEM- هیچگونه تأثیر محرکی بر تکوین جنین‌های منجمد شد و غیرمنجمد ندارد. انجماد باعث ایجاد وقفه در بیان ژن گیرنده فاکتور رشد پس از 96 ساعت کشت جنین‌های منجمد شده، نمی‌شود. کلید واژه‌ها: جنین قبل از لانه گزینی، انجماد جنین، فاکتور رشد اپیدرمال، بیان ژن. وصول مقاله: 28/9/84 اصلاح نهایی: 15/3/85 پذیرش مقاله: 18/3/85 ABSTRACT Background and Aim: Successful development and implantation of cryo-preserved embryos depend on suitable culture medium, cytokines, growth factors and genomic expression. Epidermal growth factor and its receptor have important roles on embryonic development and implantation. The purpose of this study was to investigate the influence of EGF on preimplantation development and to detect mRNA for the EGF receptor in vitrified mouse embryo. Materials and Methods: 8 to 16 celled mouse embryos were collected from super-ovulated NMRI mice 56 to 64 h after HCG injection and divided into 4 groups: two control groups were cultured in MEM-α (control 1) and MEM-α+EGF (10 ng/ml) as control 2. The experimental groups were vitrified immediately after collection and then cultured for 96h in MEM-α and M-α+EGF (l0 ng/ml) respectively. Expression of EGFR in hatched and hatching blastocysts was studied too. Following RT, PCR nested primers were designed to optimize the specificity. Results: The results showed that blastocyst formation and hatching rates were significantly lower in vitrified embryos and degeneration rate was significantly higher in these groups. Blastocyst formation, hatching and degeneration rates were not significantly different in control group 1 compared to control group 2 and also in exp. group 1 in comparison with exp. group 2. 96 hours after culture, mRNA expression of EGFR was detected in embryos in the four groups. Conclusion: In conclusion addition of EGF (10 ng/ml) to a complex medium like (MEM-α) doesn’t have any stimulatory effect on embryonic development of vitrified and non-vitrified embryos. Vitrification did not prevent EGFR expression after 96h of culturing, but it seems that addition of EGF to the medium stimulates EGFR expression in mouse blastocysts. Key words: Preimplantation embryo, Epidermal growth factor, Cryopreservation, Gene expression. جنین قبل از لانه گزینی، انجماد جنین، فاکتور رشد اپیدرمال، بیان ژن. Preimplantation embryo, Epidermal growth factor, Cryopreservation, Gene expression. 60 70 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-168&slc_lang=fa&sid=1 Nasim Ghorbanmehr نسیم قربانمهر 540031947532846001226 540031947532846001226 No Mansoureh Movahedin منصوره موحدین mansoure@modares.ac.ir 540031947532846001329 540031947532846001329 Yes Seyed Javad Mola سید جواد مولی 540031947532846001330 540031947532846001330 No