fa کشت کراتینوسایت‌های انسانی در محیط کشت عاری از سرم عمومى General پژوهشي اصیل Original Research چکیده زمینه و هدف: سلول‌های کراتینوسایت انسانی ابزار مفیدی جهت انجام مطالعات سلول درمانی به منظور بهبود سوختگی‌ها و زخم‌های مزمن محسوب می‌شوند. همچنین کراتینوسایت‌ها با کارائی بالا به سلول‌های پرتوان القائی تبدیل می‌شوند. در این مطالعه جزئیات مربوط به روش‌های جداسازی، کشت و تکثیر سلول‌های کراتینوسایت از نمونه پوستی ختنه‌گاه انسان، توصیف شده است. روش بررسی: در این مطالعه که از نوع آزمایشگاهی، و مشاهده‌ای بود. نمونه مربوط به پوست ختنه‌گاه نوزادانی که به تازگی ختنه شده بودند تحت شرایط استریل به آزمایشگاه منتقل شد. از آنزیم دیسپاز جهت جداسازی اپیدرم از درم و از آنزیم تریپسین برای جداسازی سلول‌های کراتینوسیت موجود در لایه اپیدرم استفاده شد. سلول‌ها در ظروف کشت پوشش داده شده با کلاژن نوع I انسانی و محیط کشت اپی‌لایف عاری از سرم، کشت داده شدند. ارزیابی‌های مورفولوژیک و ایمونوسیتوشیمی جهت تایید ماهیت سلول‌های جداسازی شده انجام شد. یافته‌ها: نتایج ارزیابی‌های انجام شده نشان داد که سلول‌های جداسازی شده دارای مورفولوژی تیپیک کراتینوسایت‌ها بوده و آنتی‌ژن اختصاصی کراتینوسایت‌ها CK14 را هم بیان می‌کنند. هر 4 الی 5 روز یکبار سلول‌ها به نسبت 1 به 2 پاساژ داده شدند. بعد از پاساژ 10 تکثیر سلول‌ها به شدت کاهش یافته و از نظر مورفولوژیک ظاهری پهن و نازک پیدا کردند. نتیجه‌گیری: در این مطالعه نحوه جداسازی و تکثیر کراتینوسایت‌های انسانی مشتق از نمونه پوستی ختنه‌گاه انسان در آزمایشگاه بهینه‌سازی شد. از آنجاییکه بیش از بیست بار سلول‌ها با موفقیت جداسازی شدند می‌توان نتیجه گرفت ، روش معرفی شده در این مقاله که نسبت به روش‌های پیشین همراه با مقداری تعدیل و بصورت جزیی‌تری توصیف شده است در آزمایشگاه‌های دیگر نیز تکرار پذیر است. کلید واژه‌ها: کراتینوسایت‌های انسانی، نمونه پوست ختنه‌گاه انسان، سایتوکراتین 14، محیط عاری از سرم وصول مقاله :18/3/92 اصلاحیه نهایی:14/10/92 پذیرش:17/10/92 Background and Aim: Keratinocytes are useful for cellular transplantation studies in order to improve functional outcome in burn patients and chronic wounds. Recently they have been used for generation of iPS cells with high efficiency. In this study, we described the details on separation, culture and proliferation of human keratinocytes from foreskin samples. Material and Method: In this experimental and qualitative study we obtained neonatal foreskin samples following newborn circumcision under sterile conditions. We used dispase enzyme to separate the epidermis from the dermis. Trypsin enzyme was used for isolation of keratinocyte cells from the epidermis layer. Isolated cells were cultured in type I human collagen-coated dishes and serum-free Epilife medium. We assessed morphological and immunocytochemical aspects of the isolated cells. Results: Morphological and Immunocytochemical analyses revealed that isolated cells have typical keratinocyte morphology and they could express CK14 which is a specific marker of the keratinocytes. The cells were successfully sub-cultured at a split ratio of 1:2 every 4 to 5 days. After passage 10, a significant decrease in the proliferation of the human keratinocyte cells was observed. Morphologically the cells were flat and thin. Conclusion: In this study we improved the method of isolation and cultivation of human keratinocyte from foreskin. Using this method, we isolated human keratinocytes for more than 20 times. Thus, it can be concluded that this method is reproducible in other laboratories. Keywords: Human keratinocytes, Foreskin, Cytokeratin 14, Serum free medium. Received: Jun 8, 2013 Accepted: Jan 7, 2014 کراتینوسایتهای انسانی, نمونه پوست ختنه‌گاه انسان, سایتوکراتین 14, محیط عاری از سرم Human keratinocytes, Foreskin, Cytokeratin 14, Serum free medium. 21 30 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-441&slc_lang=fa&sid=1 Sona Zare سونا زارع 540031947532846005592 540031947532846005592 No Kurdistan University دانشگاه کردستان Tayeb Ghadimi طیب قدیمی 540031947532846005593 540031947532846005593 No Kurdistan University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی کردستان Mohammad Ali Zarei محمد علی زارعی 540031947532846005594 540031947532846005594 No Kurdistan University دانشگاه کردستان Fardin Fathi فردین فتحی farfath@gmail.com 540031947532846005595 540031947532846005595 Yes Kurdistan University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی کردستان