|
تولید ایمونوگلوبولین مرغی (IgY) علیه پروتئین نوترکیب LTB از اشرشیاکلی انتروتوکسیژنیک ( ETEC) و ارزیابی اثر محافظتی آن در مدل حیوانی
|
مریم مافی1    ، سید لطیف موسوی گرگری 2، شهرام نظریان3 ، فاطمه محمدخانی1 |
1- دانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی میکروبی، گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه شاهد، تهران، ایران
2- دکتری تخصصی بیوشیمی، گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه شاهد، تهران، ایران. ، slmousavi@shahed.ac.ir
3- مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران |
|
|
چکیده: (1561 مشاهده) |
زمینه و هدف: اشرشیاکلی انتروتوکسیژنیک یکی از رایج‌ترین عوامل باکتریایی مولد اسهال در جهان است. از مهم‌ترین فاکتورهای حدت‌زا ETEC) Enterotoxigenic Escherichia coli)، می‌توان به زیر واحد B توکسین حساس به حرارت اشاره کرد که قسمت اتصالی توکسین را شکل می‌دهد. در مطالعه پیش رو آنتی‌بادی مرغی علیه پروتئین نوترکیبLymphotoxin Beta (LTB) تولید و اثر محافظتی آن در مدل حیوانی مورد آزمایش قرار گرفت.
مواد و روش‌ها: 100 میکروگرم پروتئین نوترکیب LTB به صورت داخل عضلانی به مرغ‌ها تزریق شد. تیتر آنتی‌بادی در سرم مرغ‌ها اندازه‌گیری و تخم‌مرغ‌ها جمع‌آوری و(IgY) Immunoglobulin Y ها از زرده تخم‌مرغ با کمک سدیم کلراید تخلیص و تیتر آنتی‌بادی با روش ELISA بررسی شد. توانایی IgY در ممانعت از عملکردLT توکسین بر سلول‌هایY1 در رقت‌های متفاوت IgY سنجیده شد. به منظور بررسی اثر باکتری تیمار شده با IgY بر سلول‌های اپیتلیال روده، از روش استاندارد لوپ ایلئال استفاده گردید.
یافته‌ها: القاء بیان پروتئین منجر به تولید LTB نوترکیب با وزن تقریبی 14 کیلو دالتون شد. غلظت پروتئین تخلیص شده 5/4 میلی‌گرم بر میلی لیتر بود. با ایمن‌سازی مرغ‌ها تیتر آنتی‌بادی سرمی افزایش یافت. آنتی‌بادی مرغی علیه پروتئین LTB با غلظت 12 میلی گرم بر میلی‌لیتر از زرده تخم مرغ تخلیص شد. IgY علیه پروتئین نوترکیب LTB در رقت 125 میکروگرم بر میلی‌لیتر اثرات توکسین حساس به حرارت LT بر سلول‌های Y1 را خنثی کرد. در تست لوپ ایلئال خنثی سازی توکسین با رقت 1/5 میلی‌گرم بر میلی‌لیترIgY، مانع از عملکرد توکسین در روده شد. تجمع مایع درون لوپ 74/8درصد در مقایسه با لوپ های کنترل کاهش یافت.
نتیجه‌گیری: نتایج به دست آمده بیانگر آن است که می‌توان از آنتی‌بادی مرغی اختصاصی علیه پروتئین نوترکیب LTB به عنوان آنتی‌بادی پیشگیرانه جهت جلوگیری از عملکرد توکسین حساس به حرارت باکتری ETEC استفاده نمود. |
|
| واژه‌های کلیدی: اشیرشیاکلی انتروتوکسیژنیک، انتروتوکسین حساس به حرارت، ایمنی غیرفعال، ایمنوگلوبولین، فاکتوربیماری‌زایی |
|
|
متن کامل [PDF 1419 kb]
(623 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي اصیل |
موضوع مقاله:
بیوتکنولوژی
دریافت: 1399/2/1 | پذیرش: 1399/10/22 | انتشار: 1400/10/13
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
