fa توسعه یک مدل آزمایشگاهی آلودگی پشه آنوفل استفنسی به پلاسمودیوم برگئی و شناسایی مولکولی اسپوروزوئیت ها با استفاده از qPCR انگل شناسی و قارچ شناسی Parasitology and Mycology پژوهشي اصیل Original Research <span style="font-size:12pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span b="" lang="FA" style="font-family:" zar="">زمینه و هدف:</span></b><b><i> </i></b><span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">مالاریا یک بیماری عفونی شایع</span></span> <span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">است که در اثر ابتلا به پاتوژنی به نام پلاسمودیوم ایجاد می&shy;شود که با گزش پشه آنوفل ماده به میزبان مهره دار منتقل می&shy;شود. </span></span><span lang="FA" style="background:yellow"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">هدف این مطالعه توسعه مدل آزمایشگاهی <i>پلاسمودیوم برگئی</i>-موش بالب سی-<i>آنوفل استفنسی</i> با تأکید بر کاربرد روش حساس </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:11.0pt"><span style="background:yellow"><span style="color:black">qPCR</span></span></span><span lang="FA" style="background:yellow"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> برای تشخیص عفونت اسپوروزوئیت های <i>پلاسمودیوم برگئی</i> در <i>آنوفل استفنسی</i> می باشد.</span></span></span><span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span b="" lang="FA" style="font-family:" zar="">مواد و روش&shy;ها:</span></b> <span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">موش بالب سی</span></span> <span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">ماده</span></span> <span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">آلوده به <i>پلاسمودیوم برگئی</i> برای خونخواری پشه&shy;های <i>آنوفل</i> <i>استفنسی</i> استفاده گردید. سپس پشه&shy;ها به مدت 24 روز در دمای 21-19 درجه سانتی گراد و رطوبت 60 الی 80 درصد نگهداری شدند. به منظور بررسی حضور اسپوروزوئیت&shy;ها، غدد بزاقی پشه ها با میکروسکوپ نوری بررسی شدند. به منظور تأیید آلودگی، تست </span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="color:black">qPCR</span></span><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> با تکثیر اختصاصی ژن </span></span><i><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="color:black">cytochrome b </span></span></i><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="color:black">(<i>cytb</i>)</span></span><span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> انگل <i>پلاسمودیوم برگئی</i> انجام شد. <span style="background:lime">در نهایت </span></span></span><span lang="FA" style="background:lime"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">جهت بررسی قابلیت اسپوروزوئیت&shy;ها در آلودگی میزبان بعدی، در روز 21 بعد از خونخورای پشه های آلوده جهت خونخواری موش بالب سی استفاده شدند.</span></span></span><span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="font-size:10.0pt"><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span b="" style="font-family:" zar="">&nbsp;یافته‌ها:</span></b> <span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">در بررسی آلودگی غدد بزاقی پشه&shy;های مورد بررسی با روش </span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="color:black">qPCR</span></span><span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">، اسپوروزوئیت&shy;ها در تمامی پشه&shy;ها موجود بودند که میانگین عدد </span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="color:black">Cq</span></span><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> در تست </span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="color:black">qPCR</span></span><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> (33/84</span></span><span calibri="" lang="FA" style="font-family:"><span style="color:black">&plusmn;</span></span><span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">2/18) بود. نتایج آنالیز منحنی استاندارد بر روی نمونه کنترل مثبت عدد </span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="color:black">R²</span></span><span b="" lang="FA" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> برابر با 98/0 و شیب خط برابر با 38/3- را نشان داد &nbsp;و </span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="color:black">Cq</span></span><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> حد تشخیص 34 بدست آمد.</span></span> <span lang="FA" style="background:lime"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">بعلاوه نتایج بررسی اسمیر موش&shy;ها در روز 5 بعد از خونخواری نشان داد که تمامی موش هایی که برای گزش پشه&shy;های آلوده استفاده شدند، آلوده به انگل <i>پلاسمودیوم برگئی</i> بودند&nbsp; (قابلیت آلودگی %100اسپوروزوئیت ها).</span></span></span> <span dir="LTR" style="font-family:"Arial",sans-serif"></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <b><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:130%"><span b="" style="font-family:" zar="">نتیجه‌گیری:</span></span></span></b> <span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:130%"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">در این مطالعه جهت تأیید آلودگی اسپوروزوئیتی در پشه&shy;های گروه آزمون از روش مولکولی </span></span></span></span><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:130%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">qPCR</span></span></span></span><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:130%"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> با تکثیر ژن </span></span></span></span><i><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:130%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">cytb</span></span></span></span></i><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:130%"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> انگل <i>پلاسمودیوم برگئی</i> استفاده شد که در مقایسه با روش میکروسکوپی حساسیت بالاتری نشان داد. نتایج تست </span></span></span></span><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:130%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">qPCR</span></span></span></span><span dir="RTL" style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:130%"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> نشان دهنده میزان آلودگی بالای اسپوروزوئیتی در پشه&shy;ها بود. از مدل آزمایشگاهی ارائه شده در این مطالعه می&shy;توان در تحقیقات بعدی جهت ارزیابی استراتژی&shy;های مسدودکننده انتقال و یا بررسی برهمکنش انگل-پشه آنوفل استفاده نمود.</span></span></span></span> <span style="font-size:12pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b>Background and Aim:</b> Malaria is a prevalent infectious disease caused by parasites of the genus <em>Plasmodium</em>, transmitted to vertebrate hosts through <em>Anopheles</em> vectors. <span style="background:yellow">This study focuses on developing an experimental model using <em>Plasmodium berghei</em>, BALB/c mice, and <em>Anopheles stephensi</em>, emphasizing the application of qPCR for sensitive detection of <em>Plasmodium berghei</em> sporozoites infection in <em>Anopheles stephensi</em>.</span><span style="font-size:10.0pt"></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:normal"><span style="text-autospace:none"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b>Materials and Methods:<i> </i></b>Female BALB/c mice infected with <em>Plasmodium berghei</em> were used for blood feeding of <em>Anopheles stephensi</em>. Then mosquitoes were kept for 24 days at 19-21 &deg;C and 60-80% relative humidity. Microscopic evaluation of mosquito salivary glands for sporozoites was conducted. To confirm infection, a qPCR assay targeting the <em>Plasmodium berghei</em> <i>cytb</i> gene was conducted. <span style="font-size:11.0pt"><span style="background:lime"><span style="color:black">Finally, to assess the infectivity of sporozoites for second host, the infected mosquitoes were used for blood feeding of </span></span></span><span style="background:lime">BALB/c mice on day 21 after blood feeding</span><span style="font-size:11.0pt"><span style="background:lime"><span style="color:black">.</span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:normal"><span style="text-autospace:none"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b>Results:<i> </i></b>qPCR analysis confirmed sporozoites in 100% of the infected mosquitoes, with a mean Cq value of 18.84 &plusmn; 2.33. Standard curve analysis of the positive control sample showed an R&sup2; value of 0.98 and a slope of -3.38, with a Cq detection limit of 34 cycles. <span style="font-size:11.0pt"><span style="background:lime"><span style="color:black">Additionally, the blood smears of mice after 5 days of mosquitoes blood feeding showed that all of the mice were infected with <i>Plasmodium berghei</i>, indicating 100% infectivity of sporozoites.</span></span></span><span style="font-size:10.0pt"></span></span></span></span></span></span><br> <b><span style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:130%"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Conclusion: </span></span></span></b><span style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:130%"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">This study developed a qPCR analysis with specific amplification of the <em>P. berghei</em> <i>cytb</i> gene, demonstrating higher sensitivity compared to microscopic examination. The qPCR results, showed a high infection frequency in the mosquitoes. This model can be instrumental in future research on transmission-blocking strategies or parasite-<em>Anopheles</em> interactions.</span></span></span> آنوفل استفنسی، اسپوروزوئیت، پلاسمودیوم برگئی، تست qPCR، مالاریا Anopheles stephensi, Malaria, Plasmodium berghei, qPCR test, Sporozoite 0 0 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-8233-1&slc_lang=fa&sid=1 Zeinab Mohammadi Firouz زینب محمدی فیروز zmohammadi@yahoo.com 5400319475328460072985 5400319475328460072985 No Zahra Sadat Mousavi Shafi زهرا سادات موسوی شفیع zmoosavi@gmail.com 5400319475328460072986 0009-0006-5897-5152 No Flora Forouzesh فلورا فروزش forozesh@gmail.com 5400319475328460072987 5400319475328460072987 No Akram Abouie Mehrizi اکرم ابوئی مهریزی aboueia@gmail.com 5400319475328460072988 5400319475328460072988 No Jafar Joorbandi Sani جعفر جوربندی ثانی jafar.sani2020@gmail.com 5400319475328460072989 0009-0001-7162-4828 No Hemn Yousefi هیمن یوسفی yosefih@yahoo.com 5400319475328460072990 5400319475328460072990 No Sakineh Pirahmadi سکینه پیراحمدی s.pirahmadi2020@googlemail.com 5400319475328460072991 5400319475328460072991 Yes