fa جداسازی و القای تمایز سلولهای بنیادی عصبی قشری از جنین رت عمومى General پژوهشي اصیل Original Research چکیده زمینه و هدف: سلولهای بنیادی عصبی در تکامل سیستم عصبی جنینی نقش اساسی دارند و همچنین در بزرگسالی توانایی خود تجدیدی این سلولها می تواند در عملکردهایی مانند یادگیری، حافظه و پاسخ به آسیب، تأثیر گذار باشد. این سلولها در نواحی مختلفی از CNS در مراحل مختلف تکاملی وجود دارند. هدف از این مطالعه جداسازی، تایید بنیادی بودن و القای تمایز سلولهای جداسازی شده از کورتکس جنین 15 روزه رت بود. روش بررسی: مطالعه حاضر به صورت تجربی و روی قشر مغز جنین های 15 روزه رت (6 سر) انجام شد. بعد از گذشت 15 روز از زمان تشکیل پلاک در رت ماده، حیوانات به آزمایشگاه منتقل و تحت بیهوشی و رعایت شرایط استریل، در بافر HBSS با هدایت استرئوسکوپ، لایه های مننژ کنار زده شد و قسمت کورتکس فرونتال جنینها جدا و بعد از طی مراحل جداسازی از بافتهای اضافی، در محیط کشت DMEM-F12 که حاوی فاکتورهای رشد bFGFو EGF و مکمل B27 بود کشت داده شدند. محیط کشت سلولها، جهت حفظ حالت تکثیری و جلوگیری از تمایز روزانه تعویض گردید. جهت القای تمایز از محیط DFN (DMEM-F12 و مکمل N2) عاری از فاکتورهای رشد استفاده گردید. جهت تأیید بنیادی بودن و تمایز به انواع سلولهای عصبی از تکنیک ایمونوسیتوشیمی استفاده شد. یافته ها: بررسیهای ایمونوسیتوشیمی نشان دادند که این سلولها بنیادی عصبی هستند (بیان مارکر nestin) و قابلیت تمایز به نورون (بیان مارکر Beta tubulin III)، الیگودندروسیت (بیان مارکر OSP) و آستروسیت (بیان مارکر GFAP) را دارند. نتیجه گیری: این روش ابزاری مناسب جهت جداسازی سلولهای بنیادی عصبی جنینی است و با توجه به اینکه این سلولها منشأ جنینی دارند، می توانند جهت بررسی تأثیر عوامل مختلف بر فرآیند تکامل CNS و پیوند در مدلهای مختلف ضایعات نورودژنراتیو مفید باشند. کلید واژه ها: سلولهای بنیادی عصبی، جداسازی، جنین رت وصول مقاله :15/6/90 اصلاحیه نهایی: 26/7/90 پذیرش مقاله:14/8/90 ABSTRACT Background and Aim: Neural stem cells (NSCs) play an essential role in the development of embryonic nervous system and have the capacity for self-renewal in the adulthood which may be important for normal functions of the CNS, such as learning, memory and response to injury. These cells exist at different stages of development in different areas of the CNS. The purpose of this study was isolation and confirmation of stem cell and induction of differentiation of the cells isolated from the 15 day old embryonic rat cortex. Material and Methods: This was an experimental study on 15 day old embryonic rat cortices (n=6). 15 days after plug formation in female rats, the animals were transported to the laboratory. Under anesthesia and sterile condition, embryos were removed from the uterus. The meninges were separated by use of a stereoscope and the cortices of the embryos were dissected in HBSS buffer. Then the cortices were cut into small pieces and cultured in DMEM-F12 medium containing bFGF, EGF and B-27 supplement. The medium changed every day to keep the cells in an undifferentiated and proliferative state. DFN medium (DMEM-F12 and supplements N2) without growth factors was used for induction of differentiation. Immunocytochemical technique was used for confirmation of stem cells and detection of various neural cell types. Results: Immunocytochemical evaluation revealed that, these cells were neural stem cells (nestin positive) and had the potential to differentiate in to the neuronal (expression of Beta tubulin III), oligodendrocyte (expression of OSP marker) or astrocyte (expression of GFAP marker). Conclusion: This is a reliable method for isolation of embryonic neural stem cells and considering their embryonic origin they can be used to investigate the effect of various agents on the process of CNS development. Also they might be effective in the treatment of neurodegenerative lesions. Key words: neural stem cells, rat, isolation, differentiation Received: Sep 6, 2011 Accepted: Nov 5, 2011 Conflict of interest: Nill سلولهای بنیادی عصبی, جداسازی, جنین رت neural stem cells, rat, isolation, differentiation 44 49 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-313&slc_lang=fa&sid=1 Kambiz Hasanzadeh کامبیز حسن زاده 540031947532846006829 540031947532846006829 No Kurdistan University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی کردستان Esmael Izadpanah اسماعیل ایزدپناه eizadpanah2000@yahoo.com 540031947532846006830 540031947532846006830 Yes Kurdistan University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی کردستان Fardin Fathi فردین فتحی 540031947532846006831 540031947532846006831 No Kurdistan University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی کردستان Faramarz Allahdini فرامرز اله دینی 540031947532846006832 540031947532846006832 No Kurdistan University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی کردستان Qader Salehnejad قادر صالح نژاد 540031947532846006833 540031947532846006833 No Kurdistan University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی کردستان Alireza Asgari علیرضا عسگری 540031947532846006834 540031947532846006834 No Kurdistan University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی کردستان