fa بررسی نقش سویه‌های تیپیک اشریشیا کلی انتروآگره گیتیو (tEAEC) در اسهال کودکان عمومى General پژوهشي اصیل Original Research چکیده زمینه و هدف: سویه‌های اشریشیاکلی انترواگره گیتیو عامل ایجاد اسهال حاد و مزمن و اسهال پایدار در کودکان می‌باشند. این سویه‌ها دارای الگوی چسبندگی اختصاصی اگره گیتیو (stacked brick) به سلول‌های اپیتلیالی مانند HeLa و HEp-2 هستند. استفاده از تکنیک PCR بر اساس حضور ژنهای مرتبط با ویرولانس، تشخیص سویه‌های EAEC را تسهیل می‌نماید. هدف از انجام این مطالعه ارزیابی روش PCR ژن pCVD432 جهت شناسائی سویه‌های EAEC و وجود ژنهای ویرولانسastA, aap, aafA, aggA, aggR جهت افتراق سویه‌های تیپیک و آتیپیک EAEC می‌باشد. روش بررسی: در این تحقیق 140 نمونه مدفوع جمع‌آوری شده از کودکان زیر 12 سال دارای اسهال مراجعه‌کننده به بیمارستان بعثت همدان در سال 87-86 مورد برسی قرار گرفتند. بعد از تلقیح نمونه‌ها به محیط مکانکی آگار در دمای 37 درجه سانتی‌گراد بمدت 18 ساعت انکوبه گردیدند. بعد از شناسائی کلنی‌های اشریشیاکلی با تستهای بیوشیمیائی، ابتدا با استفاده از پرایمر pCVD432 که اختصاصی سویه‌های EAEC است، سویه‌های EAEC شناسایی و پس از آن فاکتورهای ویرولانس آنها با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن‌های ویرولانس aggR ، aggA ، aafA ، aaP و astA مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته‌ها: از 140 بیمار مبتلا به اسهال 15(8/10%) سویه اشریشیا کلی دارای ژن pCVD432 ایزوله گردید. ژن aggR در 11(3/73%) سویه شناسائی گردید. ژنهای aggA و aafA به ترتیب در 3 و 4 ایزوله وجود داشت. ژن aap در 9 سویه و ژن astA در 7 سویه مثبت گزارش گردید. چندین ترکیب مختلف از شاخص‌های ژنتیکی در بین سویه‌های EAEC مشاهده شد و مشخص گردید که شایعترین الگوهای ژنومی aggR-aap با 3/53% وaggR-aafA با 7/26% بودند. نتیجه‌گیری: نتایج این مطالعه نشان می‌دهد که در این منطقه سویه‌های EAEC یکی از شایعترین پاتوژنهای روده‌ای محسوب می‌گردند. PCR ژن pCVD432 بعنوان معمول‌ترین هدف جهت شناسائی مولکولی این سویه‌ها می‌باشد. سویه‌های تیپیکال EAEC با دارا بودن ژن aggR شیوع بالائی در سویه‌های ایزوله شده دراین منطقه را نشان داده‌اند و با توجه به الگوی فاکتورهای ویرولانس دارای هتروژنی هستند. کلید واژه‌ها: اشریشیا کلی انتروآگره گیتیو، واکنش زنجیره‌ای پلیمراز، کودکان وصول مقاله: 11/10/89 اصلاحیه نهایی: 4/4/90 پذیرش مقاله: 15/6/90 ABSTRACT Background and Aim: Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) strains have been implicated as causative agents of acute, chronic and persistent diarrhea in children. EAEC have special aggregative adherence pattern for HEp-2 or HeLa cells. PCR methods based on the presence of essential virulence factors would facilitate the diagnosis of EAEC strains. The aim of this study was to assess the usefulness of the PCR assay targeting the pCVD432gene for the detection of EAEC strains and the presence of aggR, agg, aafA, aap and astA genes which can be used for the differentiation of typical and atypical EAEC strains. Materials and Methods: One hundred and forty faecal samples were collected from children of less than 12 years of age with diarrhea at the Besat Hospital, in Hamadan, between July 2007 and May 2008. The faecal samples were plated onto MacConkey agar and incubated at 37 oC for 18 hours. E.coli colonies were identified by biochemical tests. EAEC strains were identified by ues of pCVD432 primer which is specific for EAEC strains. Then their virulence factors were evaluated by use of specific primers of aggR, aggA, aafA, aap and astA genes. Results: Strains of E. coli harboring the pCVD432 gene were found in the faecal samples from 15 (10.8%) patients. The aggR gene was present in 11(73.3) strains. The aggA gene was found in 3 isolates and 4 strains had the aafA gene. The aap and astA genes were found in 9 and 7 strains, respectively. Several different combinations of the genetic markers were found among the EAEC strains. The most prevalent combinations were aggR/aap, found in 8 (53.3%) and aggR/aafA detected in 4(26.7%) strains. Conclusions: The results of this study showed that EAEC strains were one of the most prevalent enteric pathogens in children in this region. The pCVD432 gene PCR assay is the most common method for detection of EAEC strains. Typical EAEC strains with aggR gene had a high prevalence in this region and considering the pattern of virulence factors, they were heterogenous. Key words: EAEC, PCR, children Conflict of Interest: Nill Received: Jan 31, 2011 Accepted: Sep 6, 2011 اشریشیا کلی انتروآگره گیتیو، واکنش زنجیره‌ای پلیمراز، کودکان EAEC, PCR, children 39 47 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-302&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Mehdi Aslani محمد مهدی اصلانی 540031947532846002416 540031947532846002416 No Iran’s Pasture Institute انستیتوپاستور ایران Ali Zavari علی زواری 540031947532846002417 540031947532846002417 No Hamadan University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی همدان Mohammad Yousef Alikhani محمد یوسف علیخانی alikhani43@yahoo.com 540031947532846002418 540031947532846002418 Yes Hamadan University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی همدان