Scientific Journal of Kurdistan University of Medical Sciences
مجله علمي دانشگاه علوم پزشكي كردستان
SJKU
General
http://sjku.muk.ac.ir
54
journal54
1560-652X
2345-4040
sjku
10.61186/sjku
en
jalali
1390
5
1
gregorian
2011
8
1
16
2
online
1
fulltext
fa
بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب انتهای کربوکسیل نوروتوکسین بوتولینوم A در باکتری اشریشیاکلی به عنوان کاندیدای تولید واکسن بوتولیسم
Expression of recombinant Hc domain of Clostridium botulinum neurotoxin A in E. coli and its purification as a vaccine candidate against botulism
عمومى
General
پژوهشي اصیل
Original Research
چکیده
زمینه و هدف: بوتولیسم بیماری کشندهای است که توسط نوروتوکسین یکی از هفت نوع کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد میشود. بخش کربوکسیل زنجیره سنگین نوروتوکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ A(BoNT/A-Hc)، از قابلیت بالایی در تحریک سیستم ایمنی برخوردار است که امروزه برای تولید واکسن نوترکیب علیه بوتولیسم به کار میرود. هدف از این پژوهش بیان و تخلیص فرم محلول این بخش از نوروتوکسین در باکتری اشریشیاکلی نوترکیب میباشد.
روش بررسی: در این تحقیق وکتور pET28aحاوی ژن BoNT/A-Hc به باکتری اشریشیاکلی نوترکیب انتقال داده شد. در ادامه، بهترین کلنی از سویه نوترکیب بر اساس سه شاخصه مهم میزان رشد باکتری، بیان پروتئین و پایداری پلاسمید انتخاب شد. سپس بیان محصول در محیط کشت LB و M9 اصلاح شده بررسی، و پروتئین مورد نظر با ستون کروماتوگرافی رزینی تخلیص گردید.
یافتهها: در شرایط بهینه شده کشت باکتری در مقیاس فلاسک، 52 میلیگرم پروتئین محلول BoNT/A-Hcبه ازای یک لیتر محیط کشت حاصل شد.
نتیجهگیری: براساس یافتههای این تحقیق میتوان نتیجهگیری کرد که انتخاب سویه مناسب براساس شاخصههای مهم رشد باکتری، بیان پروتئین نوترکیب و پایداری پلاسمید در افزایش بازدهی تولید پروتئین نوترکیب مؤثر است.
کلید واژهها: بیان پروتئین، اشریشیاکلی، کلستریدیوم بوتولینوم، بوتولیسم
وصول مقاله: 26/11/89 اصلاحیه نهایی: 21/2/90 پذیرش مقاله: 28/2/90
ABSTRACT
Background and Aim: Botulism is a lethal disease which is caused by the one of the neurotoxins of the 7 types of Clostridium botulinum. The carboxylic domain of the heavy chain of Clostridium botulinum type A neurotoxin (BoNT/A-Hc), is highly capable of activating immune system and is used for production of a vaccine against botulism. The aim of this study was to express and produce soluble form of BoNT/A-Hc in recombinant E. coli.
Materials and Methods: Hc part of BoNT/A was subcloned in pET28a vector and clone was expressed in E. coli BL21 (DE3). Then the best recombinant clones were selected based on three main factors: expression, growth and plasmid stability. Then protein expression was evaluated in LB and M9 media and the protein was purified by resin column chromatography.
Results: In flask culture, under optimal conditions of bacterial culture yielded 52mg of BoNT/A-Hc soluble protein from each liter of culture medium.
Conclusions: According to the results of this study, selection of suitable strains on the basis of important growth indices of the bacteria, expression of recombinant protein and plasmid stability can lead to in increased efficiency of the recombinant protein production.
Key Words: Protein Expresion, E. coli, Clostridium botulinum, Botulism
Conflict of Interest: Nill
Received: Feb 15, 2011 Accepted: May 18, 2011
بیان پروتئین، اشریشیاکلی، کلستریدیوم بوتولینوم، بوتولیسم
Protein Expresion, E. coli, Clostridium botulinum, Botulism
36
44
http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-290&slc_lang=fa&sid=1
Seyed Safa Ali
Fatemi
سید صفا علی
فاطمی
540031947532846002264
540031947532846002264
No
National Institute of Genetic Engineering and
پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
Khairollah
Yari
خیرا..
یاری
khirollah.yari@yahoo.com
540031947532846002265
540031947532846002265
Yes
Kermanshah University of Medical
دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه
Mahmood
Tavallaei
محمود
تولائی
540031947532846002266
540031947532846002266
No
Baqiyatallah Medical Sciences University
دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)
Danial
Kahrizi
دانیال
کهریزی
540031947532846002267
540031947532846002267
No
Razi University
دانشگاه رازی