fa بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب انتهای کربوکسیل نوروتوکسین بوتولینوم A در باکتری اشریشیاکلی به عنوان کاندیدای تولید واکسن بوتولیسم عمومى General پژوهشي اصیل Original Research چکیده زمینه و هدف: بوتولیسم بیماری کشنده‌ای است که توسط نوروتوکسین یکی از هفت نوع کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. بخش کربوکسیل زنجیره سنگین نوروتوکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ A(BoNT/A-Hc)، از قابلیت بالایی در تحریک سیستم ایمنی برخوردار است که امروزه برای تولید واکسن نوترکیب علیه بوتولیسم به کار می‌رود. هدف از این پژوهش بیان و تخلیص فرم محلول این بخش از نوروتوکسین در باکتری اشریشیاکلی نوترکیب می‌باشد. روش بررسی: در این تحقیق وکتور pET28aحاوی ژن BoNT/A-Hc به باکتری اشریشیاکلی نوترکیب انتقال داده شد. در ادامه، بهترین کلنی از سویه نوترکیب بر اساس سه شاخصه مهم میزان رشد باکتری، بیان پروتئین و پایداری پلاسمید انتخاب شد. سپس بیان محصول در محیط کشت LB و M9 اصلاح شده بررسی، و پروتئین مورد نظر با ستون کروماتوگرافی رزینی تخلیص گردید. یافته‌ها: در شرایط بهینه شده کشت باکتری در مقیاس فلاسک، 52 میلی‌گرم پروتئین محلول BoNT/A-Hcبه ازای یک لیتر محیط کشت حاصل شد. نتیجه‌گیری: براساس یافته‌های این تحقیق می‌توان نتیجه‌گیری کرد که انتخاب سویه مناسب براساس شاخصه‌های مهم رشد باکتری، بیان پروتئین نوترکیب و پایداری پلاسمید در افزایش بازدهی تولید پروتئین نوترکیب مؤثر است. کلید واژه‌ها: بیان پروتئین، اشریشیاکلی، کلستریدیوم بوتولینوم، بوتولیسم وصول مقاله: 26/11/89 اصلاحیه نهایی: 21/2/90 پذیرش مقاله: 28/2/90 ABSTRACT Background and Aim: Botulism is a lethal disease which is caused by the one of the neurotoxins of the 7 types of Clostridium botulinum. The carboxylic domain of the heavy chain of Clostridium botulinum type A neurotoxin (BoNT/A-Hc), is highly capable of activating immune system and is used for production of a vaccine against botulism. The aim of this study was to express and produce soluble form of BoNT/A-Hc in recombinant E. coli. Materials and Methods: Hc part of BoNT/A was subcloned in pET28a vector and clone was expressed in E. coli BL21 (DE3). Then the best recombinant clones were selected based on three main factors: expression, growth and plasmid stability. Then protein expression was evaluated in LB and M9 media and the protein was purified by resin column chromatography. Results: In flask culture, under optimal conditions of bacterial culture yielded 52mg of BoNT/A-Hc soluble protein from each liter of culture medium. Conclusions: According to the results of this study, selection of suitable strains on the basis of important growth indices of the bacteria, expression of recombinant protein and plasmid stability can lead to in increased efficiency of the recombinant protein production. Key Words: Protein Expresion, E. coli, Clostridium botulinum, Botulism Conflict of Interest: Nill Received: Feb 15, 2011 Accepted: May 18, 2011 بیان پروتئین، اشریشیاکلی، کلستریدیوم بوتولینوم، بوتولیسم Protein Expresion, E. coli, Clostridium botulinum, Botulism 36 44 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-290&slc_lang=fa&sid=1 Seyed Safa Ali Fatemi سید صفا علی فاطمی 540031947532846002264 540031947532846002264 No National Institute of Genetic Engineering and پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری Khairollah Yari خیرا.. یاری khirollah.yari@yahoo.com 540031947532846002265 540031947532846002265 Yes Kermanshah University of Medical دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه Mahmood Tavallaei محمود تولائی 540031947532846002266 540031947532846002266 No Baqiyatallah Medical Sciences University دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) Danial Kahrizi دانیال کهریزی 540031947532846002267 540031947532846002267 No Razi University دانشگاه رازی