fa ارزیابی اثر پیشگیری کننده هیدروژل آلژینات در طی تمایز نورون های تمایز یافته از سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان بر کاهش میزان استرس اکسیداتیو عمومى General پژوهشي اصیل Original Research <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">زمینه و هدف:</span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> سلول درمانی یکی از روش های درمانی امیدوار کننده</span></span></span> <span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">&nbsp;جهت درمان ضایعات نخاعی به شمار می‌رود. اما به دلیل وقوع مرگ سلولی پس از انتقال سلول ها به محل آسیب و هم چنین مهاجرت این سلول ها به نواحی دیگر غیر از محل ضایعه بعلت نبود یک بستر مناسب برای سلول ها استفاده از این روش محدود شده است. حدودا 30 سال است که مهندسی بافت با استفاده از داربست ها و ناقل های سلولی جهت انتقال سلول های موردنظر به بدن میزبان به کمک سلول درمانی آمده است. از رایج ترین ناقل های سلولی مورد استفاده در مهندسی بافت، هیدروژل ها هستند. در این مطالعه از هیدروژل آلژینات استفاده شده و اثر حفاظتی آن بر سلول های انکپسوله در مقابل رادیکال های آزاد مورد بررسی قرار گرفت.</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">مواد و روش ها :</span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> سلول های بنیادی عصبی مشتق شده از سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان در هیدروژل آلژینات کپسول دار شدند و تحت القای والپروئیک اسید به مدت یک هفته به نورون تمایز یافتند؛ سلول ها با روش های ایمونوسیتوشیمی و واکنش زنجیره ای پلی مراز معکوس ارزیابی شدند. القای آپوپتوز توسط پراکسیدهیدروژن انجام شد و میزان بقای سلول ها با روش </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">MTT</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> بررسی شد. سپس اثر حفاظتی هیدروژل در محیط آلژینات بر سلول های کپسول دار شده&nbsp; در مقابل </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">H₂O₂</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> بررسی شد و با سلول های کشت شده در محیط کشت دوبعدی با استفاده از روش های </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">MTT</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> و</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Frap </span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">&nbsp;مقایسه شد.</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">یافته ها:</span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> نتایج نشان داد که میزان حیات سلول های قرار گرفته در هیدروژل، تفاوت معناداری با میزان حیات سلولی در محیط کشت دوبعدی داشت. هم چنین نتایج </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">RT-PCR</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> بیان </span></span></span>&nbsp;<span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">mRNA</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">ژن های </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Survivin</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> و </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Bcl₂</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> را در گروه سلول های کپسول دار شده در هیدروژل آلژینات و بیان </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">mRNA</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> ژن </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Bax</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> را در گروه سلول های کشت شده در محیط کشت دوبعدی نشان داد که نشان دهنده افزایش آپوپتوز در گروه کشت شده دوبعدی و تفاوت آن با سلول های کپسول دار شده بود .همچنین نتایج تست </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Frap</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> گروه سلول های اکپسول دار شده در هیدروژل با گروه سلول های دو بعدی تفاوت معناداری داشت که نشان دهنده خاصیت آنتی اکسیدانی هیدروژل آلژینات بود و در بررسی میزان</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">&nbsp; ROS </span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">&nbsp;بین دو گروه دو بعدی و سه بعدی تفاوت معناداری داشت.</span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black">نتیجه گیری:</span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> هیدروژل آلژینات از ناقل های سلولی مناسب جهت کشت سلول های بنیادی عصبی است که اثرات مفیدی در حفاظت سلول ها در مقابل </span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">H₂O₂</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"> دارد.</span></span></span></span></span></span></span></span> <span style="font-size:11pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Background and Aim</span></span></b><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">: Cell therapy is a feasible method for </span></span><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span calibri="" style="font-family:"><span style="color:black">the </span></span></span><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">treatment of spinal cord injury as well as other neurological disorders. Because of the cell death reported to be in the cell transplants, the use of +scaffolds can be useful to improve cell protection, resulting in an increase in their survival and growth, and differentiation. Since alginate hydrogel biopolymer was reported to be effective in </span></span><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span calibri="" style="font-family:"><span style="color:black">treating</span></span></span><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> spinal cord lesions, in this study, we intended to evaluate the protectivity of alginate hydrogel against free radicals in the cultured neural stem cells (NSCs) induced into neuronal phenotype using valproic acid as inducer, and improvement of their survival will be assessed.</span></span><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Materials and Methods</span></span></b><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">: Bone marrow stromal stem cell-derived neural stem cells encapsulated in alginate hydrogel, were used in this study. The encapsulated cells were induced by valproic acid and the cells </span></span><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span calibri="" style="font-family:"><span style="color:black">were</span></span></span><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> evaluated by immunocytochemical methods and reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). The induction of apoptosis was achieved by hydrogen peroxide (H₂O₂), and the cell viability was evaluated by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT).</span></span> <span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">The Protective Effect of alginate hydrogel in front of H2O2 was evaluated by Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) and MTT. The control groups were two-dimensional (2-D) cultured of the induced NSCs into neuronal phenotype by valproic acid as well as induction of apoptosis by H2O2</span></span><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Results</span></span></b><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">: The results showed that the viability of neuronal phenotype treated by H2O2 in alginate hydrogel was higher than that of cells cultured under the same condition in 2-D culture, also, the expression of Bcl2 and survivin was higher, while the expression of Bax was lower. Similar results were noticed with the FRAP technique</span></span><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Conclusion</span></span></b><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">: The results showed that alginate hydrogel has a protective effect on the induced NSCs into neuron-like cells, following induction of apoptosis by H2O2. The results of gene expression and FRAPwere consistent with the above results</span></span><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <br> <span style="font-size:11pt"><span style="text-justify:kashida"><span style="text-kashida:0%"><span style="line-height:200%"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:200%"><span b="" style="font-family:" zar=""><span style="color:black"></span></span></span></span></span></span></span></span></span></span> هیدروژل آلژینات, حفاظت عصبی, کشت سه بعدی, القا, سلول های بنیادی عصبی, والپروئیک اسید Alginate hydrogel, neuroprotection, 3D culture, induction, neural stem cell, Valproic acid 1 19 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4148-1&slc_lang=fa&sid=1 Leila Salari asl لیلا سالاری اصل gdghsal2015@gmail.com 0480331758 5400319475328460061281 No Master of Sciences, Department of Anatomical Sciences, Faculty of Medical sciences, Tarbiat modares university, Tehran, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه علوم تشریح، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران Taki Tiraihi تقی طریحی ttiraihi@gmail.com 4711036735 5400319475328460061282 Yes Professor, Department of Anatomical Sciences, Faculty of Medical sciences, Tarbiat modares university, Tehran, Iran استاد، گروه علوم تشریح، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران