Scientific Journal of Kurdistan University of Medical Sciences
مجله علمي دانشگاه علوم پزشكي كردستان
SJKU
General
http://sjku.muk.ac.ir
54
journal54
1560-652X
2345-4040
sjku
10.61186/sjku
en
jalali
1389
9
1
gregorian
2010
12
1
15
3
online
1
fulltext
fa
بررسی جهشهای ژن بتا گلوبین در بیماران تالاسمی با استفاده از روش PCR-SSCP
Analysis of beta thalassemia mutations using the single strand conformation polymorphism (SSCP) technique
عمومى
General
پژوهشي اصیل
Original Research
چکیده
زمینه و هدف: بتا تالاسمی یکی از شایع ترین بیماری های ژنتیکی در ایران است و بیش از دو میلیون حامل بتا تالاسمی در ایران وجود دارد. شناسایی جهشهای ژن بتاگلوبین برای برنامههای تشخیصی و مدیریتی معین مانند تشخیص پیش از زایمان بیماری بتاتالاسمی ضروری است. در کشور ما روش PCR-ARMS(PCR-amplification refractory mutation system) بطور گسترده برای شناسایی جهشهای ژن بتا گلوبین استفاده میشود.
روش بررسی: در این مطالعه کاربرد روش PCR-SSCP (PCR-single strand conformation polymorphism) در شناسایی جهشهای بتا تالاسمی توضیح داده میشود. در بیمارانی که جهشهای آنها قبلاً با توالی یابی تایید شده بودند، حدود 281 جفت باز حاوی اگزون یک ژن بتا گلوبین با روش PCR تکثیر گردید. 5/2 میکرولیتر محصول واکنش PCRرا مطابق تکنیک SSCP در ژل اکریل آمید الکتروفورز و باندها با رنگآمیزی نیترات نقره آشکار شدند. هفت جهش و یک پلیمورفیسم با این تکنیک بررسی شد.
یافتهها: مشخص گردید الگوی حرکت تک رشتهایها کاملاً متفاوت با همدیگر و با نمونه کنترل بود.
نتیجهگیری: تکنیک PCR-SSCP میتواند نیاز ما را برای توالی یابی مستقیم DNA ژنومی کاهش داده و در کشورهای در حال توسعه که بیماریهای هموگلوبینی ژنتیکی بالا و منابع مالی کم است مفید باشد.
کلید واژهها: تالاسمی،SSCP، ژن بتا گلوبین
وصول مقاله: 22/3/89 اصلاحیه مقاله: 3/8/89 پذیرش مقاله: 20/8/89
ABSTRACT
Background and Aim: β-thalassemia (β-thal) is one of the most prevalent hereditary diseases in Iran. There are more than two million carriers of β-thal in Iran. Detection of the beta globin gene mutations is necessary for a definitive diagnostic and management plan such as prenatal diagnosis of β-thalassemia. In our country, the PCR-Amplification Refractory Mutation System (PCR-ARMS) has been frequently used for detection of beta globin gene mutations.
Material and Methods: Here, we used the PCR-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) assay for detection of mutations of beta globin gene. In the patients with confirmed mutations, we amplified 281base pairs containing exon of one of a beta globin gene by PCR. Based on SSCP technique 2.5 µl of the reaction products appeared in polyacryamide gel electrophoresis and the bands were visualized by silver staining. Seven mutations and one polymorphism were evaluated by PCR-SSCP assay.
Results: The results of this study demonstrated that the patterns of mobility of single strands were different from each other and those of control sample.
Conclusion: Our study showed the PCR-SSCP technique can meet the need for direct genomic sequencing of DNA and could be applied in the developing countries where financial resources are limited but genetic hemoglobin disorders are highly prevalent.
Key words: Thalassemia, SSCP, β- globin gene.
Conflict of Interest: Nill
Received: June 12, 2010 Accepted: Nov 11, 2010
تالاسمی،SSCP، ژن بتا گلوبین
Thalassemia, SSCP, β- globin gene.
13
19
http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-250&slc_lang=fa&sid=1
Naser
Pooladi
ناصر
پولادی
540031947532846001611
540031947532846001611
No
Azarbaijan University of Tarbiat moallem
دانشگاه تربیت معلم آذربایجان
Mohammad Ali
Hosseinpour Feizi
محمد علی
حسین پور فیضی
pourfeizi@eastp.ir
540031947532846001612
540031947532846001612
Yes
Tabriz University
دانشگاه تبریز
Mehdi
Haghi
مهدی
حقی
540031947532846001613
540031947532846001613
No
Islamic Azad University-Ahar Branch
دانشگاه آزاد اسلامی - واحد اهر
Parvin
Azarfam
پروین
آذرفام
540031947532846001614
540031947532846001614
No
Tabriz University
دانشگاه تبریز
Abbasali
Hosseinpour Feizi
عباسعلی
حسین پور فیضی
540031947532846001615
540031947532846001615
No
Tabriz University of Medical Science
دانشگاه علوم پزشکی تبریز