fa پتانسیل واکسنی پروتئین کپسید خارجی (VP4) روتاویروس کلون شده در پلاسمید عمومى General پژوهشي اصیل Original Research چکیده زمینه و هدف: روتاویروسها عامل گاستروآنتریت کودکان زیر 5 سال هستند و سالانه موجب حدود 800000 مرگ می‌شوند. افزودن واکسن روتاویروس در برنامه ایمن سازی کودکان می‌تواند باعث کاهش قابل ملاحظه مرگ و میر کودکان به خصوص در کشورهای درحال توسعه شود. پروتئین VP4 خار کپسید خارجی روتاویروس بوده که روتاویروس توسط آن به گیرنده خود متصل می‌شود. پروتئین VP4 موجب تولید آنتی بادی خنثی‌کننده می‌شود. با در نظر گرفتن موارد فوق ما، ژن VP4 روتاویروس را در پلاسمید به منظور بیان VP4 در آینده کلون کردیم. روش بررسی: سلول BSC-1 به صورت تک لایه کشت داده شد. وقتی کشت سلولی CPE کامل روتاویروس را نشان داد سه مرتبه ذوب و فریز شد. روتاویروس توسط اولتراسانتریفیوژ نسبتاً خالص گردید. پرایمرهای اولیگونوکلئوتیدی مخصوص قطعه 4 ژنوم روتاویروس که VP4 را کد می‌کند ساخته شد. ژنوم RNA ویروس استخراج و به عنوان الگو برای ساخت cDNA توسط ترانس کریپتاز معکوس استفاده گردید. سپس به وسیله PCR تکثیر داده و محصول PCR در ناقل پلاسمید کلون شد. پلاسمید حاصل با آنزیمهای محدودالاثر و تعیین توالی مورد تحلیل قرار گرفت. یافته‌ها: نتیجه تعیین توالی به وسیله نرم افزار BLAST تحلیل شد که 100% با توالی قطعه شماره 4 روتاویروس موجود در بانک ژنی NCBI مشابه بود. نتیجه‌گیری: نتیجه تحلیل توالی تایید می‌کند که نوکلئوتیدهای ژن VP4 بعد از پاساژهای طولانی روتاویروس SA11 در آزمایشگاه ما ثابت مانده است. کلید واژه‌ها: روتاویروس، VP4، کلونینگ، واکسن وصول مقاله: 17/3/89 اصلاحیه نهایی: 30/4/89 پذیرش مقاله: 30/4/89 ABSTRACT Background and aim: Rotaviruses are associated with endemic diarrhea in children under the age of 5, leading to approximately 800,000 deaths every year. Introduction of rotavirus vaccines into childhood immunization programs can contribute to substantial reduction in mortality from rotavirus gastroenteritis in developing countries. VP4 is outer capsid spike protein of rotavirus by which virus can bind to its receptor. VP4 protein can induce production of neutralizing antibodies. Regarding these concepts we cloned VP4 gene of rotavirus in plasmid vector for future expression. Materials and Methods: BSC-1 cells were cultured as a monolayer. Rotavirus CPE positive cell cultures were freeze-thawed three times. Rotavirus was partially purified by ultracentrifuge. Oligonucleotide primers, specific for gene segment 4 which encodes VP4, were synthesized. Rotavirus RNA extracted and used as a template for synthesis of cDNA by reverse transcriptase. Then they proliferated by PCR and PCR products were cloned into plasmid vector which was analyzed by restriction enzymes and sequencing. Results: Sequencing result was analyzed with BLAST software that had a 100% homology with SA11 rotavirus genome segment 4 in NCBI GeneBank. Conclusion: Sequencing result confirms highly that the nucleotide sequences of VP4 gene after long and continuous passage of SA11 rotavirus is conserved in our laboratory. Key words: Rotavirus, VP4, Cloning Conflict of Interest: Nill Received: Jun 7, 2010 Accepted: Jul 21, 2010 روتاویروس، VP4، کلونینگ، واکسن Key words: Rotavirus, VP4, Cloning 1 11 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-238&slc_lang=fa&sid=1 Mazaher Khodabandeloo مظاهر خدابنده لو mazaher-khodabandehloo@muk.ac.ir 540031947532846001287 540031947532846001287 Yes Bijan Bambai بیژن بمبئی 540031947532846001481 540031947532846001481 No Zohreh-Azita Sadigh زهره-آزیتا صدیق 540031947532846001482 540031947532846001482 No