fa شناسایی موتاسیونهای مرتبط با مقاومت به ایزونیازید در مایکوباکتریوم توبرکلو‌زیس بیماران مسلول با استفاده از روش PCR-RFLP و MAS PCR عمومى General پژوهشي اصیل Original Research چکیده زمینه و هدف: ایزونیازید یکی از داروهای مهم خط اول درمان سل می‌باشد. مقاومت به این دارو در بسیاری از نقاط جهان رو به افزایش است. جهش‌های ایجاد شده در ژنKatG و inhA در اغلب موارد عامل مقاومت به ایزونیازید می‌باشند. هدف از این مطالعه ارائه روشی مناسب و سریع برای شناسایی موتاسیونهای مرتبط با مقاومت به ایزونیازید در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس می‌باشد. روش بررسی: در این مطالعه وجود جهش در نواحی خاصی از ژنهای katG وinhA در90 نمونه کشت مثبت بیماران مسلول ریوی پس از انجام تست‌های حساسیت داروئی بررسی شد. برای تعیین جهش‌های کدون 315 KatG از تکنیکPCR-RFLP استفاده گردید. محصول PCR حاصل از تکثیر این قطعه ژنی (bp620) توسط آنزیم محدودالاثر MspI برش داده شد. برای شناسائی جهش در ژن inhA نیز از تکنیک MAS-PCR استفاده شد. یافته‌ها: 5/34% درصد از نمونه‌های مقاوم به ایزونیازید فنوتیپ Thr315 و 5/65% از نمونه‌های مقاوم فنوتیپ Ser315 را نشان دادند. اختصاصیت Thr315 برای نمونه‌های مقاوم 100% می‌باشد. همچنین در این مطالعه از 52 نمونه مقاوم به ایزونیازید 6/34% در کدون 463 دارای اسیدآمینه Arg و 4/65% دارای اسیدآمینه Leu بودند. فراوانی جهش در لوکوس (15C →T-)inhA نمونه‌های MDR و غیرMDR به ترتیب 20% و 7/16% درصد بود. نتیجه‌گیری: با استفاده از روش PCR-RFLP (آنزیم MSPI) و MAS PCR جهش‌های ایجاد شده در کدون 315 ژن KatG و ناحیه پروموتورinhA شناسایی می‌شوند. این روشها علاوه بر سادگی و ارزان بودن نسبت به روشهای دیگر در مدت زمان کمتری نتایج دقیق و مطمئنی را فراهم می‌آورند. کلید واژه‌ها: مایکوباکتریم توبرکلوزیس، مقاومت به ایزونیازید،PCR-RFLP، KatG،inhA ،MAS PCR وصول مقاله: 9/10/88 اصلاح نهایی: 16/10/88 پذیرش مقاله: 17/11/88 ABSTRACT Background and Aim: Isoniazid is one of the essential first line drugs in TB treatment. Resistance rate to this drug is increasing in many parts of the world. Mutations in KatG and inhA genes are frequently the cause of resistance of mycobacterium TB to INH. The aim of this study was to find a precise method for early detection of mutations associated with resistance of mycobacterium TB to INH. Materials and Methods: After performing sensitivity tests, presence of mutations in special loci of katG and inhA genes in 90 specimens obtained from positive cultures of TB patients was investigated. PCR-RLFP method was used to detect mutations in katG 315 codon. The PCR product resulting from the reproduction of this genetic segment (620 bp) was digested by restriction enzyme MspI. To identify mutations in inhA gene, MAS-PCR technique was used. Results: 34.5% of the INH resistant strains had Thr315 phenotype and 65.5% had Ser 315 phenotype. Thr 315 is 100% specific for determination of INH resistant isolates. Among 52 resistant isolates, 34.6% had Arg and 65.4% had Leu in codon 463. The frequencies of mutations in the (-15C → T) locus of inhA gene were 20% and 16.7% in MDR and Non MDR isolates respectively. Conclusions: By using PCR-RFLP with restrictive enzyme and MAS PCR mutations in codon 315 of KatG gene and promoter location of inhA gene can be identified. These methods are simpler and cheaper than other methods and provide early accurate and reliable results. Key words: Mycobacterium tuberculosis, Isoniazid resistance, PCR-RFLP, KatG, inhA. Conflict of Interest: Nill Received: Dec 30, 2009 Accepted: Feb 7, 2010 مایکوباکتریم توبرکلوزیس، مقاومت به ایزونیازید،PCR-RFLP، KatG،inhA ،MAS PCR Mycobacterium tuberculosis, Isoniazid resistance, PCR-RFLP, KatG, inhA. 1 9 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-214&slc_lang=fa&sid=1 Farideh Dinmohammadi فریده دین محمدی 540031947532846001268 540031947532846001268 No Parisa Farnia پریسا فرنیا pfarnia@hotmail.com 540031947532846001422 540031947532846001422 Yes Alireza Biglari علیرضا بیگلری 540031947532846001423 540031947532846001423 No Mehdi Kazempoor مهدی کاظم پور 540031947532846001424 540031947532846001424 No Rashid Ramazanzadeh رشید رمضان زاده 540031947532846001425 540031947532846001425 No Mohammad Reza Masjedi محمد رضا مسجدی 540031947532846001426 540031947532846001426 No Ali Akbar Velayati علی اکبر ولایتی 540031947532846001427 540031947532846001427 No