fa بررسی برهم کنش لاین سلولی L929 با داربست سه بعدی پوست انسانی عمومى General پژوهشي اصیل Original Research <p dir="RTL"><strong>زمینه و هدف:</strong> داربست ایده آل برای مهندسی بافت، باید از ماتریکس خارج سلولی تقلید کند تا سبب تسهیل رشد و تمایز سلول ها شود. داربست های زیستی از سلول زدایی بافت های حیوانی یا انسانی حاصل می شوند ماتریکس خارج سلولی بافت های طبیعی را می توان برای کاربردهای ترمیمی حتی به صورت زنوژنیک، استفاده نمود. در این تحقیق برای اولین بار سلول زدایی کامل بافت پوست انسان (اپیدرم به همراه درم) صورت گرفت<span dir="LTR">.</span> این محصول می تواند به منظور استفاده های کلینیکی در درمان سوختگی های شدید مورد استفاده قرار گیرد. عدم جداسازی اپیدرم از درم می تواند در حفظ بیشتر رطوبت بدن تا ترمیم کامل زخم های پوستی مشارکت داشته باشد.</p> <p dir="RTL"><strong>روش بررسی:</strong> بافت های پوست انسانی با ترکیب سه روش فیزیکی (انجماد آهسته، انجماد- ذوب سریع)، آنزیمی (تریپسین 25/0 درصد به مدت 18 ساعت) و شیمیایی (<span dir="LTR">sodium dodecyl sulfate (SDS</span> 1 درصد به مدت 12 ساعت) سلول زدایی شدند . سپس داربست های سه بعدی تهیه شده با تعداد 10⁵&times;5 سلول کشت داده شدند. سرانجام، نمونه ها در هفته های 2،1، 3 و 4 بعد از کشت با رنگ آمیزی های مختلف مورد بررسی های هیستولوژیکی قرار گرفتند.</p> <p dir="RTL"><strong>یافته ها:</strong> مطالعات میکروسکوپی داربست با رنگ آمیزی های مختلف، حذف سلول ها و حفظ رشته های کلاژن را در بافت پوست انسان تایید نمودند. با مطالعه ی آزمایشگاهی رفتار سلول ها در هفته های مختلف کشت،&nbsp; چسبندگی و تکثیر سلول ها ی <span dir="LTR">L929</span> مشاهده گردید. در آنالیز های آماری درصد تراکم سلولی در هفته ی دوم در مقایسه با سایر هفته ها اختلاف معناداری را نشان داد 001/0><span dir="LTR">P</span>از هفته سوم تعداد سلولها کاهش پیدا کردند.</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه گیری:</strong> نتایج نشان داد که <span dir="LTR">ECM</span> به جا مانده از پوست انسانی، داربست مناسبی برای استقرار، رشد و تمایز سلول های <span dir="LTR">L929</span> می باشد.از طرف دیگر، به دلیل تراکم بالای فیبرهای کلاژن و تخلخل پایین داربست های تهیه شده، هیچ نفوذ و مهاجرتی به درون درم روی نداد.</p> <p dir="RTL"><strong>کلید واژه ها:</strong> ماتریکس خارج سلولی، پوست انسان، سلول زدایی، سلول های فیبروبلاستی <span dir="LTR">L929</span>، داربست<span dir="LTR">.</span></p> <p><span dir="RTL">وصول مقاله:8/2/94 اصلاحیه نهایی:4/11/94 پذیرش:24/11/94</span></p> <p><strong>Background and Aim</strong>: Ideal scaffold for tissue engineering must be a mimic of extracellular <em>matrices</em> that facilitates proliferation and differentiation of the cells. Biological scaffolds are prepared from decellularization of human or animal tissues. Extracellular matrix of natural tissues can be used as a scaffold for regenerative applications, even xenogenically. In this study, for the first time complete human skin tissue (dermis plus epidermis) was decellularized. This matrix can be used in the clinics for the treatment of severe burns. &nbsp;Unseparated epidermis from the dermis may cause the skin to maintain higher levele of moisture until complete healing.</p> <p><strong>Material and Methods</strong>: Human skin tissues were decellularized by combination of three methods: physical (slow freezing and snap freeze&ndash;thaw), enzymatic (trypsin 0.25% for 18 hours) and chemical (sodium dodecyl sulfate- SDS 1% for 12 hours). Then, the prepared decellularized 3D matricies with 5&times;10⁵ of cells were cultured. Finally, histological studies were performed after 1, 2, 3 and 4 weeks of culture by different stains.</p> <p><strong>Results</strong>: Histological studies confirmed cell elimination and also preservation of collagen fibers in the human skin matrix. In vitro analysis of cellular behaviors showed adhesion and proliferation of L929 fibroblast cell line in the culture in different weeks. Statistical analysis indicated significant induction of cell densities at the end of the 2^nd week (p<0.001) compared to the other weeks of our study. The number of cells reduced after the 3^rd week.</p> <p><strong>Conclusion</strong>: The results indicated that remnants of ECM of the human skin can be a suitable matrix for adherence, proliferation and differentiation of L929 cells. On the other hand, because of high density of collagen fibers and low porosity of prepared scaffolds, we found no penetration and migration into the dermis.</p> <p><strong>Keywords</strong>: Extracellular matrix, Human skin, Decellularization, L929 fibroblast cells, Scaffold.</p> <p></p> <p><strong>Received: </strong>Apr 28, 2015<strong>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; Accepted: </strong>Feb 13, 2016</p> ماتریکس خارج سلولی, پوست انسان, سلول زدایی, سلول های فیبروبلاستی L929, داربست. Extracellular matrix, Human skin, Decellularization, L929 fibroblast cells, Scaffold. 22 33 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-64&slc_lang=fa&sid=1 Mehrnegar Roghan Nezhad مهرنگار رجچان نژاد 5400319475328460014256 5400319475328460014256 No Roya Lari رویا لاری royalari@gmail.com 5400319475328460014257 5400319475328460014257 Yes Naser Mahdavi Shahri ناصر مهدوی شهری 5400319475328460014258 5400319475328460014258 No Leila Izi لیلا ایزی 5400319475328460014259 5400319475328460014259 No Ali Birjandi nejad علی بیرجندی نژاد 5400319475328460014260 5400319475328460014260 No