fa کلونینگ و بیان ژن muc1 در میزبان پروکاریوتی به منظور بکار گیری در تشخیص زود هنگام سرطان سینه عمومى General پژوهشي اصیل Original Research زمینه و هدف: سرطان سینه دومین و شایع‌ترین علت مرگ در میان زنان جهان می‌باشد. غدد پستانی طبیعی و کارسینوماهای پستانی باید تحت کنترل عوامل نظارتی، فعال‌کننده‌ها و مهارکننده‌ها در داخل بافت سینه و همچنین یک سری فاکتورهای رشد، گیرنده‌ها و پروتئین‌ها در خارج از بافت سینه باشند. سطوح آنتی ژن‌های مرتبط با تومور می‌توانند به عنوان شاخص پیش‌بینی در درمان این بیماری استفاده شوند. از روش های نوین درمانی استفاده از آنتی بادی بر علیه آنتی ژن MUC1 است که در 90٪ سرطان های سینه دارای افزایش بیان می باشد. MUC1 سرطانی عملکرد E Cadherinرا که یک مولکول موثر در چسبندگی سلولی است، مختل می‌سازد. هدف از این تحقیق تولید پروتئین نوترکیبMUC-1 به منظورتشخیص زود هنگام سرطان سینه می باشد. روش بررسی: بخشی از ژن muc-1 با طراحی پرایمر مناسب بوسیله ی PCR تکثیر شده و سپس درون ناقل پلاسمیدی pET28a جهت بیان در سیستم پروکاریوت کلون شد. پلاسمید pET28a به روش شوک حرارتی وارد E.coli BL21DE3 گردید و فرآیند کلونینگ با روش های هضم آنزیمی و تعیین توالی مورد تائید قرار گرفت. باکتری حاوی پلاسمید نوترکیب با استفاده ازIPTG القا شده و سپس بیان پروتئین توسط ژل SDS-PAGE بررسی شد. یافته ها: بخشی از ژنmuc-1 در پلاسمید مذکور کلون گردید و با روش های هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید گردید. بیان ژن مورد نظر با استفاده از وسترن بلاتینگ تائید گردید. نتیجه گیری: بخشی از ژن muc-1 انسانی به صورت نوترکیب در باکتری E.coli تولید و تخلیص گردید که کاندید مناسبی برای تشخیص سرطان می باشد. واژگان کلیدی: کلونینگ ، muc1 ، بیان ژن، سرطان وصول مقاله:17/3/93 اصلاحیه نهایی:24/3/94 پذیرش:8/4/94 Background and Aim: Breast cancer is the second most common cause of death among women in the world. Normal mammary gland and breast carcinomas are under the control of regulatory factors, activators and inhibitors inside the breast tissue, as well as a number of growth factors, receptors and proteins outside the breast tissue. Levels of tumor-associated antigens can be used as a predictor in the treatment of this disease. Use of antibodies against MUC1 antigen which is over expressed in 90% of breast cancers is a modern method of treatment. MUC1 tumor antigen disturbs the function of E-cadherin as a cell adhesion molecule. The purpose of this study was to produce MUC-1 recombinant protein for early diagnosis of breast cancer. Material and Methods: A part of MUC-1 gene was amplified by PCR. Then it was cloned into plasmid pET28a in order to be expressed in prokaryotic system. Plasmid pET28a was entered into E.coli BL21DE3 using heat shock method. Cloning process by digestive enzymes and sequence determination were confirmed. Bacteria containing recombinant plasmids were induced by using IPTG and the protein expression was investigated by SDS-PAGE gel. Results: The gene was cloned in the plasmid and the method was confirmed by enzyme digestion and sequencing. Gene expression was confirmed by western blotting. Conclusion: A part of human recombinant MUC-1 gene was produced in E.coli bacteria which can be used as a suitable diagnostic candidate for breast cancer. Keywords: Cloning, MUC-1, Expression Received: May 7, 2014 Accepted: Jun 29, 2015 کلونینگ , muc1 , بیان ژن, سرطان Cloning, MUC-1, Expression 1 11 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-14&slc_lang=fa&sid=1 Marjaneh Kazemi مرجانه کاظمی 5400319475328460018725 5400319475328460018725 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. کارشناسی ارشد، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) ، تهران ، ایران. Jafar Amani جعفر امانی jafar.amani@gmail.com 5400319475328460018726 5400319475328460018726 Yes Associate Professor, Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران، تلفن ثابت: 82482549-021 Ali Hatef Salmanian علی هاتف سلمانیان 5400319475328460018727 5400319475328460018727 No Department of Plant Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology, Tehran, Iran. گروه بیوتکنولوژی گیاهی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران. Elahe Gheybi الهه غیبی 5400319475328460018728 5400319475328460018728 No Department of Biology, Faculty of Science, University of Guilan, Rasht, Iran. کارشناسی ارشد، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه گیلان، رشت، ایران.