fa شناسایی آنتی ژن اختصاصی کیست هیداتیک توسط روش وسترن بلاتینگ به منظور کاربرد تشخیصی عمومى General پژوهشي اصیل Original Research چکیده زمینه و هدف: با توجه به اهمیت بیماری هیداتیدوز در جمعیت‌های انسانی و دامی، بررسی حاضر با هدف شناسایی آنتی‌ژن تشخیصی کیست هیداتیک با استفاده از روش ایمونوبلاتینگ انجام گرفت. روش بررسی: بدین منظور بعد از تهیه کیست هیداتیک گوسفندی، چهار نوع آنتی‌ژن مایع خام، مایع جوشانده، آنتی‌ژن هموژنیزه پروتواسکولکس و آنتی‌ژن دیواره کیست هیداتیک تهیه گردید. نمونه‌های سرمی مثبت و عاری از آلودگی در بازرسی کشتارگاهی تهیه شد. الکتروفورز پادگن‌ها توسط روش (SDS-PAGE) با استفاده از سیستم ژل ناپیوسته با ژل جداکننده به غلظت 12% و ژل متراکم‌کننده به غلظت 5% در مجاورت نشاندار با وزن مولکولی مشخص صورت گرفت. در استفاده از روش وسترن بلاتینگ برای شناسایی پادگن اختصاصی، یک ورقه از غشا نیتروسلولز بر روی ژل انتقال یافت و تحت الکتروفورز قرار گرفت. بعد از انتقال پروتئین‌ها به غشا نیتروسلولز از شیر خشک بدون چربی بعنوان بافر مسدودکننده و سپس بترتیب از آنتی‌بادی اولیه و ثانویه و از سوبسترای دی آمینو بنزیدین جهت مشخص شدن باندهای اختصاصی استفاده شد. یافته‌ها: بررسی نتایج الگوی الکتروفورتیک چهار آنتی‌ژن تهیه شده از کیست هیداتیک نشان داد در آنتی‌ژن خام مایع کیست 9 باند پروتئینی از 14 تا بیش از 116 کیلو دالتون وجود دارد که در بین آنها چهار باند با وزن مولکولی 18، 23، 40 و 64 کیلو دالتون مشخص‌تر و مشترک با پادگن مایع جوشانده هستند. در الکتروفورز آنتی‌ژن دیواره 9 باند از 14 تا بیش از 116 کیلو دالتون و در پروتواسکولکس 10 باند پروتئینی با وزن مولکولی بیشتر از 35 کیلو دالتون وجود داشت. نتیجه‌گیری:‌ در ایمونوبلاتینگ آنتی‌ژن مایع خام یک باند پروتئینی با وزن مولکولی 35 و در آنتی‌ژن دیواره کیست 3 باند 30، 33 و 46 کیلو دالتون بعنوان آنتی‌ژنهای اختصاصی شناسایی شدند. کلید واژه‌ها: کیست هیداتیک، آنتی‌ژن، وسترن بلاتینگ. وصول مقاله: 1/5/88 اصلاح نهایی: 15/6/88 پذیرش مقاله: 19/6/88 ABSTRACT Background and Aim: Considering the importance of hydatidosis among human beings and domesticated animals, the aim of the present study was to identify the diagnostic antigen of hydatid cyst by immuno-blotting method. Material and Methods: After the preparation of sheep hydatid cyst, four kinds of antigens of raw fluids, boiled fluids, homogenized antigen of protosculex and the antigen of hydatid cyst wall were isolated. The negative and positive serum samples without any impurity were prepared in slaughterhouse. Electrophoresis of antigens by means of SDS–PAGE method using disconnected gel along with isolating gel with the concentration of 12% and compressing gel with the concentration of 5% in the vicinity of a marker with certain molecular weight was carried out. In western blotting method for detection of the specific antigen, a sheet of nitrocellulose membrane was transferred over the gel and electrophoresis was performed. After transferring protein to nitrocellulose membrane, fatless powdered milk was used as a blocking buffer and then, primary and secondary antibodies and benzidin di–amino substrate were used accordingly to identify specific bands. Results: Electrophoresis pattern of the four antigens extracted from the cyst showed that among 14 protein bands, there are 9 protein bands with molecular weights of more than 116 Kilo-Dalton (kD) among which 4 bands with molecular weights of 18, 23, 40, and 64 kD were more prominent and similar to the antigens of boiled fluid. In the electrophoresis of wall antigen, 9 protein bands out of 14 bands had molecular weights of more than 116 kD and there were 10 protein bands with molecular weights of more than 35 kD in the protosculex. Conclusion: By immuno-blotting method in raw fluid antigen, a protein band with molecular weight of 35 kD, and in cyst wall antigen 3 protein bands with molecular weights of 30, 33, 46 kD were identified as specific antigens. Key words: Hydatid cyst, Zoonosis, Antigen, Western blotting. Conflict of Interest: Nill Received: July 23, 2009 Accepted: Sep 6, 2009 کیست هیداتیک، آنتی‌ژن، وسترن بلاتینگ. Hydatid cyst, Zoonosis, Antigen, Western blotting 14 20 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-154&slc_lang=fa&sid=1 Shahin Fakour شاهین فکور Fakours@yahoo.com 540031947532846001213 540031947532846001213 Yes Behnam Meshki بهنام مشکی 540031947532846001298 540031947532846001298 No