fa شناسایی همزمان و مقایسه بروسلاهای بیماری زا در بین نمونه‌های سرمی و خون انسان به روش Multiplex PCR وتایید نتایج آن با روش PCR-RFLP عمومى General پژوهشي اصیل Original Research مقدمه: مطالعات کمی در خصوص جداسازی بروسلا آبورتوس و بروسلا ملی تنسیس عامل بروسلوزیس از سرم بیماران انجام است، این مطالعه با هدف جداسازی همزمان بروسلاهای بیماری زا از نمونه‌های سرمی انسان به روش Multiplex PCR طراحی گردید. روش ها: در این مطالعه آزمایشگاهی، 50 نمونه خون و سرم بیمار مشکوک با علائم بالینی بروسلوزیس، پس از تیترسنجی به محیط کشت بروسلا اگار تلقیح شده و برای تشخیص، از تکنیک مولکولی Multiplex-PCR با سه پرایمر استفاده شد. به منظور کشت نمونه‌های سرم، ml 5/0 از سرم در بروسلا براث تلقیح شده و به مدت 72 ساعت در انکوباتور 37 درجه سلسیوس و 5% گاز دی اکسید کربن، گرمخانه گذاری شد. برای تأیید نتایج PCR، محصولات PCR با استفاده از آنزیم های برش دهنده TaqI و RsaI مطابق مطالعات قبلی تحت برش آنزیمی قرار گرفتند. یافته ها: از میان 50 نمونه خون 4 مورد (8%) کشت مثبت بودند که هر 4 مورد (100%) پس از بررسی خصوصیات و انجام تست های بیوشیمیایی و افتراقی به عنوان بروسلا ملی تنسیس شناسایی شدند. پس از انجام Multiplex PCR، 9 مورد (18%) مثبت و 41 مورد (82%) منفی بودند. در میان موارد مثبت سرم، باند مربوط به بروسلا ملی تنسیس در 7 مورد (78%) و باند مربوط به بروسلا ابورتوس در 2 مورد (22%) مشاهده گردید. از مجموع 50 نمونه خون 5 مورد (10%) مثبت و 45 مورد (90%) منفی بودند که در تمامی آن‌ها (100%) باند مربوط به بروسلا ملی تنسیس مشاهده گردید. تمام نتایج با روش PCR_RFLP تایید شد. نتیجه گیری: مطالعه ما نشان داد که این روش ساده و سریع بوده و حساسیت آن برای جداسازی بروسلاها (به خصوص بروسلا ابورتوس و ملی تنسیس) از سرم در مقایسه با خون کامل، بیشتر است. کلمات کلیدی: بروسلا، Multiplex-PCR، سرم خون، PCR-RFLP وصول مقاله: 16/4/93 اصلاحیه نهایی:19/7/93 پذیرش:19/9/93 Background and Aim: There are few studies on the isolation of Brucella abortus and Brucella melitensis from patients´ sera. The aim of this study was simultaneous isolation of pathogenic brucella species from human serum samples by multiplex PCR method. Material andMethods: 50 blood and serum samples isolated from patients with clinically suspected brucellosis were inoculated into brucella agar medium and we used multiplex-PCR, with three primers to detect brucella species. We incubated 0.5 ml of serum in Brucella broth for 72 hours at 37 °C in 5% carbon dioxide. To confirm the results of PCR, the PCR products were restricted by restriction enzymes, TaqI and RsaI. Result: From 50 blood samples 4 (8%) cultures were positive. Using biochemical tests and after determination of the characteristics of the positive cases, they were identified as B. melitensis. After multiplex PCR, 9 cases (18%) were positive and 41 cases (82%) were negative. Among the positive sera, B. melitensis was identified in 7 cases (78%) and B. abortus in 2 cases (22%). Of 50 blood samples, 5 (10%) were positive and 45 (90%) were negative for B. melitensis. All the results were confirmed by PCR-RFLP. Conclusion: Our study showed that multiplex PCR method was simple, rapid and is more sensitive for isolation of brucella from serum (especially B. abortus and B. melitensis) in comparison to complete blood. Keywords: Brucella spp., Multiplex-PCR, Serum blood, PCR-RFLP Received: Jul 7, 2014 Accepted: Dec 10, 2014 بروسلا, Multiplex-PCR, سرم خون, PCR-RFLP Brucella spp., Multiplex-PCR, Serum blood, PCR-RFLP 10 17 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-486&slc_lang=fa&sid=1 Elnaz Akbarzadeh الناز اکبرزاده 540031947532846007169 540031947532846007169 No Islamic Azad University, Tehran North Branch دانشگاه ازاد اسلامی واحد تهران شمال Jamileh Noroosi جمیله نوروزی 540031947532846007170 540031947532846007170 No Islamic Azad University, Tehran North Branch دانشگاه ازاد اسلامی واحد تهران شمال Vahab Piranfar وهاب پیرانفر 540031947532846007171 540031947532846007171 No Baqiyatallah University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا...(عج) Dariush Ghasemi داریوش قاسمی 540031947532846007172 540031947532846007172 No Baqiyatallah University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا...(عج) Shiva Mirkalantari شیوا میرکلانتری 540031947532846007173 540031947532846007173 No Semnan University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی سمنان Reza Mirnejad رضا میرنژاد rmirnejad@yahoo.com 540031947532846007174 540031947532846007174 Yes Baqiyatallah University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا...(عج)