fa ساخت حامل ‌ژنی مبتنی بر باکتریوفاژ M13 و ارزیابی توانایی آن در انتقال و بیان ترانسژن در رده سلولی یوکاریوتی AGS عمومى General پژوهشي اصیل Original Research مقدمه: نقایص مرتبط با عملکرد ناقل‌های ژنی اعم از ناقل‌های ویروسی و غیر ویروسی باعث شده است محققان برای دستیابی به ناقل یا ناقل‌های ژنی ایده‌آل به تحقیقات خود ادامه دهند. فاژها به خاطر داشتن یکسری مزیت‌‌ها همچون حفاظت از ژن خارجی، عدم ایمنی‌زایی و پایداری در شرایط مختلف، به عنوان گزینه‌ای مطلوب برای انتقال ژن مطرح شده‌اند. هدف از این پژوهش، دستیابی به یک سازه فاژی و ارزیابی پتانسیل آن جهت انتقال ژن به سلول‌های یوکاریوتی بوده است. روش بررسی: با برش درون سلولی ناقل فاژی Lambda-Zap CMV XR که دارای ژن GFP بوده است، سازه فاژمیدی pCMV-Script Ex بدست آمد و پس از بسته‌بندی توسط فاژ کمکی، ذرات فاژی M13 GFP حاصل شدند. ذرات فاژی حاصل جهت آلوده‌سازی رده سلولی انسانی AGS مورد استفاده قرار گرفتند. در نهایت به کمک روش‌های PCR و میکروسکوپ فلورسانس میزان ورود ذرات فاژی M13-GFP به رده سلولی انسانی مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته‌ها: بررسی سلول‌های تیمار شده با میکروسکوپ فلورسانس نشان داد که ذرات فاژی M13-GFP توانایی ورود و بیان ترانسژن در سلول‌های یوکاریوتی را دارند با این وجود کارآیی انتقال بسیار ناچیز است. همچنین نتایج حاصل از PCR گویای این مطلب است که میزان ورود حامل ژنی M13-GFP به رده سلول‌های یوکاریوتی وابسته به دوز می‌باشد. نتیجه‌گیری: نتایج گویای آن است که فاژ M13 می‌تواند به عنوان یک سیستم مناسب برای انتقال ژن به سلول‌های یوکاریوتی در نظر گرفته شود، چراکه تمایل ورود آنها به سلول‌های یوکاریوتی بسیار کم است و می‌توان با اتصال و یا نمایش مولکول‌های هدفگیری بر سطح ذرات فاژی، ترانسژن را به شکل مؤثری به سلول هدف منتقل کرد. واژه‌های کلیدی: ژن‌درمانی، انتقال ژن، فاژ M13. وصول مقاله:7/7/92 اصلاحیه نهایی:16/9/92 پذیرش:30/10/92 Background and aim: Due to some drawbacks associated with gene delivery vehicles including viral and non-viral vectors, scientists have continued their efforts to find an ideal gene delivery vehicle. Bacteriophages have been proposed as an attractive alternative gene delivery vehicle in view of their advantages such as protection of transgene, lack of immunogenicity and stability in different conditions. This study has been conducted with the aim of obtaining a construct based on M13 phage and evaluating its capability for delivering transgene to eukaryotic cells. Material and Method: pCMV-Script EX phagemid was constructed by intracellular excision of Lambda Zap CMV XR vector bearing GFP gene. Packaging of the construct using helper phage resulted in M13-GFP phage particles which used for transfection of human AGS cell line. Finally internalization of the phage particles into the AGS cell line was evaluated by PCR and florescence microscopy. Results: Examination of the treated cells with florescence microscopy indicated that M13-GFP phage particles were able to internalize and express the transgene in eukaryotic cells, but the efficiency of this trasfer was very low. PCR analysis showed that internalization of the M13 GFP gene vehicle to eukaryotic cells was dose dependent. Conclusion: The results indicated that M13 phage could be an appropriate gene delivery vehicle, because it had trivial tropism for eukaryotic cells. This means that after displaying or coupling of appropriate targeting molecules on the surface of phage particles, transgene can effectively be delivered to the target cells. Key words: Gene therapy, Gene delivery, M13 phage. Received: Sep 29, 2013 Accepted: Jan 20, 2014 ژن‌درمانی, انتقال ژن, فاژ M13. Gene therapy, Gene delivery, M13 phage. 114 123 http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-451&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Khalaj-Kondori محمد خلج کندری khalaj@tabrizu.ac.ir 540031947532846005639 540031947532846005639 Yes University of Tabriz دانشگاه تبریز Seyedeh Elham Abedheydari سیده الهام عابد حیدری 540031947532846005640 540031947532846005640 No University of Tabriz دانشگاه تبریز Mohammad Ali Hosseinpour-faizi محمد علی حسینپور فیضی 540031947532846005641 540031947532846005641 No University of Tabriz دانشگاه تبریز