:: دوره 29، شماره 4 - ( مجله علمی دانشگاه علوم پزشکی کردستان 1403 ) ::
جلد 29 شماره 4 صفحات 13-1 برگشت به فهرست نسخه ها
بیان ژن کد کننده‌ی آنتی ژن BAB1-0278 باکتری بروسلا آبورتوس در باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس
دنیا کاظمی1 ، عباس دوستی2 ، مصطفی شخصی نیایی3
1- دانشجوی دکتری. گروه زیست شناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
2- استاد، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران ، abbasdoosti@yahoo.com
3- استادیار، گروه زیست شناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
چکیده:   (2875 مشاهده)
زمینه و هدف: آنتی‌ژن   BAB1-0278بروسلا آبورتوس در ایجاد بیماری بروسلوز نقش دارد. این  آنتی‌ژن،پروتئینی به نام GcrA را رمزگذاری می‌کند که نقش اساسی در رونویسی ژن‌های هدف در چرخه سلولی دارد. از این رو BAB1-0278 دارای پتانسیل‌های منحصر به فردی در استراتژی‌های درمانی علیه بروسلا آبورتوس می‌باشد. هدف از مطالعه حاضر تولید باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس مهندسی شده بیان کننده پروتئین BAB1-0278 بروسلا آبورتوس می‌باشد.
مواد و روش‌ها: طراحی سازواره ژنی حاوی یک توالی سیگنال پپتیدی درون ناقل بیانی مبتنی بر القا با نیسین (pN3z8148-Usp45-BAB1-0278) صورت گرفت و سنتز آن توسط شرکت GENEray انجام شد. پلاسمید نوترکیب در باکتری اشریشیا کلی  ترانسفورم شد. ﺍﺳﺘﺨﺮﺍﺝ ﭘﻼﺳﻤﻴﺪ نوترکیب از باکتری‌های ترانسفورم شده صورت گرفت. لاکتوکوکوس لاکتیس توسط الکتروپوریشن هم با پلاسمید نوترکیب حاوی ژن هدف pNZ8148-Usp45-BAB1-0278 و هم با پلاسمید فاقد ژن هدف ترانسفورم شد. تایید بیان BAB1-0278 توسط تکنیک‌های واکنش زنجیره پلیمراز معکوس RT-PCR)) و سدیم دودسیل سولفات پلی آکریل آمید الکتروفورز ژل  (SDS-PAGE) و وسترن بلات انجام شد.
یافته‌ها:  BAB1-0278 بروسلا آبورتوس در لاکتوکوکوس لاکتیس بیان و به وسیله RT-PCR مورد تایید قرار گرفت. تجزیه و تحلیل SDS-PAGE پروتئین‌های جدا شده از لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیب در مقایسه با لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم نشده پروتئینی با وزن مولکولی ۱۳ کیلو دالتون را نشان داد.
نتیجه‌گیری: نتایج PCR، هضم آنزیم محدود کننده و تعیین توالی توسط شرکت GENEray نشان داد که BAB1-0278 به درستی در pNZ8148-Usp45 کلون شده است. SDS-PAGE و وسترن بلات برای آنالیز بیان پروتئین BAB1-0278 استفاده شد. لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده می‌تواند گام مهمی جهت تحقیقات واکسن خوراکی علیه بروسلا آبورتوس  باشد.

 
واژه‌های کلیدی: بروسلا آبورتوس، BAB1-0278، لاکتوکوکوس لاکتیس، واکسن، پروبیوتیک، الکتروپوریشن
متن کامل [PDF 914 kb]   (654 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي اصیل | موضوع مقاله: پزشکی مولکولی و ژنتیک
دریافت: 1401/10/15 | پذیرش: 1402/11/15 | انتشار: 1403/8/8
فهرست منابع
1. Khan MZ, Zahoor M. An Overview of Brucellosis in Cattle and Humans, and its Serological and Molecular Diagnosis in Control Strategies. Trop Med Infect Dis. 2018;3(2):65.75 [DOI:10.3390/tropicalmed3020065] [PMID] []
2. Perez A, Berhe M. Brucella, a bacterium with multiple ways of causing infection. Proc (Bayl Univ Med Cent). 2020;34(1):99-101. [DOI:10.1080/08998280.2020.1805674] [PMID] []
3. Jamil T, Khan AU, Saqib M, Muhammad H, Melzer F, Rehman A, et al. Animal and Human Brucellosis in Pakistan. Front Public Health. 2021;9:660508. [DOI:10.3389/fpubh.2021.660508] [PMID] []
4. Poveda-Urkixo I, Ramírez GA, Grilló MJ. Kinetics of Placental Infection by Different Smooth Brucella Strains in Mice. Pathogens. 2022;11(3):279. [DOI:10.3390/pathogens11030279] [PMID] []
5. Senevirathne A, Hewawaduge C, Lee JH. Live vaccine consisting of attenuated Salmonella secreting and delivering Brucella ribosomal protein L7/L12 induces humoral and cellular immune responses and protects mice against virulent Brucella abortus 544 challenge. Vet Res. 2020;51(1):6. [DOI:10.1186/s13567-020-0735-y] [PMID] []
6. Khurana SK, Sehrawat A, Tiwari R, Prasad M, Gulati B, Shabbir MZ, et al. Bovine brucellosis - a comprehensive review. Vet Q. 2021;41(1):61-88. [DOI:10.1080/01652176.2020.1868616] [PMID] []
7. Al-Mariri A, Al-Hallab L, Alabras R, Kherbik H, Khawajkiah M, et al. Protection against virulent Brucella spp. by gamma-irradiated B. ovis in BALB/c mice model. Clin Exp Vaccine Res. 2022;11(1):53-62. [DOI:10.7774/cevr.2022.11.1.53] [PMID] []
8. Tavares LM, de Jesus LCL, da Silva TF, F L Barroso, L Batista V, et al. Novel Strategies for Efficient Production and Delivery of Live Biotherapeutics and Biotechnological Uses of Lactococcus lactis: The Lactic Acid Bacterium Model. Front Bioeng Biotechnol. 2020;8:517166. [DOI:10.3389/fbioe.2020.517166] [PMID] []
9. Song AA, In LLA, Lim SHE, Rahim RA. A review on Lactococcus lactis: from food to factory. Microb Cell Fact. 2017;16(1):55. https://doi.org/10.1186/s12934-017-0754-1 [DOI:10.1186/s12934-017-0669-x]
10. Gómez L, Alvarez F, Betancur D, Oñate A. Brucellosis vaccines based on the open reading frames from genomic island 3 of Brucella abortus. Vaccine. 2018;36(21):2928-2936. [DOI:10.1016/j.vaccine.2018.04.014] [PMID]
11. Gómez L, Llanos J, Escalona E, Sáez E, Álvarez F, Molina R, et al. Multivalent Fusion DNA Vaccine against Brucella abortus. Biomed Res Int. 2017;2017:6535479. [DOI:10.1155/2017/6535479] [PMID] []
12. Fatehi Z, Doosti A, and Jami MS. "Oral vaccination with novel Lactococcus lactis mucosal live vector-secreting Brucella lumazine synthase (BLS) protein induces humoral and cellular immune protection against Brucella abortus. Archives of Microbiology. 205.4 (2023): 122.‌ [DOI:10.1007/s00203-023-03471-6] [PMID] []
13. Mandel M, Higa A. Calcium-dependent bacteriophage DNA infection. J Mol Biol. 1970;53(1):159-162. doi:10.1016/0022-2836(70)90051-3 [DOI:10.1016/0022-2836(70)90051-3] [PMID]
14. Welker DL, Coburn BM, McClatchy JH, Broadbent JR. Multiple pulse electroporation of lactic acid bacteria Lactococcus lactis and Lactobacillus casei. Journal of microbiological methods. 2019 Nov 1;166:105741. [DOI:10.1016/j.mimet.2019.105741] [PMID]
15. Mierau I, Olieman K, Mond J, Smid EJ. Optimization of the Lactococcus lactis nisin-controlled gene expression system NICE for industrial applications. Microb Cell Fact. 2005;4:16. doi:10.1186/1475-2859-4-16 [DOI:10.1186/1475-2859-4-16] [PMID] []
16. Ouwehand A, Isolauri E, Salminen S. The role of the intestinal microflora for the development of the immune system in early childhood. Eur J Nutr. 2002;41 Suppl 1:I32-7. [DOI:10.1007/s00394-002-1105-4] [PMID]
17. Ahmed FE. Genetically modified probiotics in foods. Trends Biotechnol. 2003;21(11):491-7. [DOI:10.1016/j.tibtech.2003.09.006] [PMID]
18. Sáez D, Fernández P, Rivera A, Andrews E, Oñate A. Oral immunization of mice with recombinant Lactococcus lactis expressing Cu,Zn superoxide dismutase of Brucella abortus triggers protective immunity. Vaccine. 2012;30(7):1283-90. [DOI:10.1016/j.vaccine.2011.12.088] [PMID]
19. Tabatabai LB, Pugh GW Jr. Modulation of immune responses in Balb/c mice vaccinated with Brucella abortus Cu-Zn superoxide dismutase synthetic peptide vaccine. Vaccine. 1994;12(10):919-24. [DOI:10.1016/0264-410X(94)90035-3] [PMID]
20. Oñate AA, Vemulapalli R, Andrews E, Schurig GG, Boyle S, Folch H. Vaccination with live Escherichia coli expressing Brucella abortus Cu/Zn superoxide dismutase protects mice against virulent B. abortus. Infect Immun. 1999;67(2):986-8. [DOI:10.1128/IAI.67.2.986-988.1999] [PMID] []
21. Gómez L, Llanos J, Escalona E, Sáez D, Álvarez F, Molina R, et al. Multivalent Fusion DNA Vaccine against Brucella abortus. Biomed Res Int. 2017;2017:6535479. [DOI:10.1155/2017/6535479] [PMID] []
22. Sislema-Egas F, Céspedes S, Fernández P, Retamal-Díaz A, Sáez D, Oñate A. Evaluation of protective effect of DNA vaccines encoding the BAB1_0263 and BAB1_0278 open reading frames of Brucella abortus in BALB/c mice. Vaccine. 2012; 30(50):7286-91. [DOI:10.1016/j.vaccine.2012.09.039] [PMID]

Ethics code: ﮐﺪ اﺧﻼق IR.IAU.SHK.REC.1401.002



XML   English Abstract   Print



بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.
دوره 29، شماره 4 - ( مجله علمی دانشگاه علوم پزشکی کردستان 1403 ) برگشت به فهرست نسخه ها